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關(guān)于微生物的作用和生存環(huán)境

作用：

√食物鏈√物質(zhì)鏈

√食品工業(yè)√生態(tài)群落 

√制藥工業(yè)（疫苗,、抗生素）.......

生存環(huán)境：

√土壤，空氣,，水體 

→某些惡劣條件

-海底 

-死海 

-撒哈拉沙漠 

-極地(—88℃)

-火山口的溫泉(+98℃)

-原油礦床

√微生物幾乎無(wú)處不在

關(guān)于微生物限度檢測(cè)

   初始污染菌：產(chǎn)品消毒、滅菌前的細(xì)菌總數(shù),，可判斷檢品售細(xì)菌污染的程度以及生產(chǎn)單位所用的原料,、工具設(shè)備、工藝流程,、生產(chǎn)人員的衛(wèi)生狀況,，是對(duì)檢品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。

關(guān)于微生物計(jì)數(shù)法

 檢查非規(guī)定滅菌產(chǎn)品售微生物污染程度的方法

 微生物計(jì)數(shù)法系用于能在有氧條件下生長(zhǎng)的嗜溫細(xì)菌和真菌的計(jì)數(shù),。

 當(dāng)本法用于檢查非無(wú)菌制劑及其原、輔料等是否符合規(guī)定的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時(shí),，應(yīng)按下述規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn),，包括樣品的取樣量和結(jié)果的判斷等。除另有規(guī)定外,，本法不適用于活菌制劑的檢查,。

 計(jì)數(shù)方法包括平皿法、薄膜過(guò)濾法和最可能數(shù)法（Most-Probable-Number Method,簡(jiǎn)稱(chēng)MPN法）,。MPN法用于微生物計(jì)數(shù)法時(shí)精確度較差，但對(duì)于某些微生物污染量很小的供試品,，MPN法可能是更適合的方法,。

 供試品檢查時(shí)，應(yīng)根據(jù)供試品理化特性和微生物限度標(biāo)準(zhǔn)等因素選擇計(jì)數(shù)方法,，檢測(cè)的樣品量應(yīng)盡能保證所獲得的試驗(yàn)結(jié)果能夠判斷供試品是否符合規(guī)定,。所選方法的適應(yīng)性須經(jīng)確認(rèn)。            

關(guān)于初始污染菌檢測(cè)有哪些,？

環(huán) 境：微生物計(jì)數(shù)試驗(yàn)環(huán)境應(yīng)符合微生物限度檢查的要求。檢驗(yàn)全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作,，防止再污染,，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。潔凈空氣區(qū)域,、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期進(jìn)行監(jiān)測(cè),。（參考無(wú)菌檢查法對(duì)環(huán)境的要求）

設(shè) 備：微生物限度儀（微生物過(guò)濾裝置）,、菌落計(jì)數(shù)器（如需要）

試   劑：沖洗液等同無(wú)菌檢查法。

培養(yǎng)基：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）

           沙氏葡萄糖   

           瓊脂培養(yǎng)基（SDA）

菌   株：金黃色葡萄球菌CCMCC(B)26003   

           銅綠假單胞菌CMCC(B)10104

         枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501     

         白色念珠菌CMCC(F)98001

    黑曲霉CMCC(F)98003             

    大腸埃希菌CMCC(B)44102

關(guān)于供試液制備原則

根據(jù)供試品的理化特性與生物特性,，采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時(shí),，應(yīng)均勻加熱,，契溫度不應(yīng)超過(guò)45℃。供試液從制備至加入檢驗(yàn)用培養(yǎng)基,，不得超過(guò)1小時(shí),。樣品浸提時(shí)，所用緩沖液應(yīng)沒(méi)過(guò)樣品頂端,，使得樣品被*浸沒(méi),。

關(guān)于常用供試液制備方法

（如果下列供試液制備方法經(jīng)確認(rèn)均不適用,，應(yīng)建立其他適宜的方法）

（1）水溶性供試品：

取供試品,，用PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或PH7.2磷酸鹽緩沖液,，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)提液基溶解或稀釋制成1：10供試液,。若需要，調(diào)節(jié)供試液PH值至6-8.必要時(shí),，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋,。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。

（2）水不溶性非油脂類(lèi)供試品：

取供試品,，用PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液,，或PH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基制備成1：10供試液,。分散力較差的供試品,，可在稀釋液中加入表面活性劑如0.1%（ml/ml）的聚山梨酯80，使供試品分散均勻,。若需要,，調(diào)節(jié)供試液PH值至6-8.必要時(shí)，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋,。

（3）油脂類(lèi)供試品：

取供試品,，加入無(wú)菌十四烷酸異丙酯使得=溶解，或與少量并能使供試品乳化的無(wú)菌聚山梨酯80或其他無(wú)抑菌性的無(wú)菌表面活性劑充分混勻,。表面活性劑的溫度一般不超過(guò)40℃（特殊情況下,，最多不超過(guò)45℃），小心混合,，若需要可在水浴中進(jìn)行,，然后加入預(yù)熱的稀釋液使成1：10供試液,，保溫，混合,，并在最短時(shí)間內(nèi)形成乳狀液,。必要時(shí)，用稀釋液或含上述表面活性劑的稀釋液進(jìn)一步10倍系列稀釋,。

（4）膜劑供試品：

取供試品,，剪碎，加PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液,，或PH7.2磷酸鹽緩沖液,，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，浸泡,，振搖,，制成1：10的供試液。若需要,，調(diào)節(jié)供試液PH值至6-8.必要時(shí),，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。

關(guān)于抗菌活性的去除或滅活

 供試液接種后,，按下列“微生物回收"規(guī)定的方法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)。若試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組菌落數(shù)的值小于菌液對(duì)照組菌落數(shù)值的50%,，可采用下述方法消除供試品的抑菌活性,。

（1）增加稀釋液或培養(yǎng)基體積

（2）加入適宜的中和劑或滅活劑

（3）采用薄膜過(guò)濾法

（4）上述幾種方法的聯(lián)合適用

若沒(méi)有適宜消除供試品抑菌活性的方法，對(duì)特定試驗(yàn)菌回收的失敗,，表明供試品對(duì)該試驗(yàn)菌具有較強(qiáng)抗菌活性,，同時(shí)也表明供試品不易被該類(lèi)微生物污染。但是,，供試品也可能僅對(duì)特定試驗(yàn)菌株具有抑制作用，而對(duì)其他菌沒(méi)有抑制作用,。因此,，根據(jù)供試品須符合的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)和菌數(shù)報(bào)告規(guī)則，在不影響檢驗(yàn)結(jié)果判斷的前提下,，應(yīng)采用能使微生物生長(zhǎng)的更高稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn),。若方法適用性試驗(yàn)符合要求，應(yīng)以該稀釋級(jí)供試液作為低稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行供試品檢查,。

關(guān)于微生物限度檢測(cè)--供試品監(jiān)檢查--平皿法

 平皿法包括傾注法和涂布法。除另有規(guī)定外,，取規(guī)定量供試品,，按方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法進(jìn)行供試液制備和菌數(shù)測(cè)定,，每稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少制備2個(gè)平板。

 培養(yǎng)和計(jì)數(shù)：除另有規(guī)定外,胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板在30~ 35℃培養(yǎng)3~ 5天,，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板在20~ 25~C培養(yǎng)5~ 7天,，觀察菌落生長(zhǎng)情況，點(diǎn)計(jì)平板上生長(zhǎng)的所有菌落數(shù),，計(jì)數(shù)并報(bào)告,。菌落蔓延生長(zhǎng)成片的平板不宜計(jì)數(shù)。點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)后,，計(jì)算名稀釋級(jí)供試液的平均菌落數(shù),，按菌數(shù)報(bào)告規(guī)則報(bào)告菌數(shù)。若同稀釋級(jí)兩個(gè)平板的菌落數(shù)平均值不小于15 ,則兩個(gè)平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上,。

 菌數(shù)報(bào)告規(guī)則： 需氧菌總數(shù)測(cè)定宜選取平均菌落數(shù)小于300cfu的稀釋級(jí),、霉菌和酵母菌總數(shù)測(cè)定宜選取平均菌落數(shù)小于100cfu的稀釋級(jí)，作為菌數(shù)報(bào)告的依據(jù),。取最高的平均菌落數(shù),，計(jì)算1g、1ml或10cm2供試品中所含的微生物數(shù),，取兩位有效數(shù)字報(bào)告,。

 如各稀釋級(jí)的平板均無(wú)菌落生長(zhǎng),或僅低稀釋級(jí)的平板有菌落生長(zhǎng)但平均菌落數(shù)小于1時(shí)，以< 1乘以低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù),。

關(guān)于微生物限度檢測(cè)--供試品檢查--薄膜過(guò)濾法

  除另有規(guī)定外，按計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法進(jìn)行供試液制備,。取相當(dāng)于1g,、 Iml或10cm2供試品的供試液，若供試品所含的菌數(shù)較多時(shí),，可取適宜稀釋級(jí)的供試液,，照方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法加至適量稀釋液中，立即過(guò)濾,，沖洗,，沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng),。

培養(yǎng)和計(jì)數(shù)：培養(yǎng)條件和計(jì)數(shù)方法同平皿法,，每張濾膜上的菌落數(shù)應(yīng)不超過(guò)100cfu。

菌數(shù)報(bào)告規(guī)則：以相當(dāng)于1g,、1ml或10cm2供試品的菌落數(shù)報(bào)告菌數(shù),；若濾膜上無(wú)菌落生長(zhǎng)，以< 1報(bào)告菌數(shù)（每張濾膜過(guò)濾1g,、1ml或10cm2供試品),，或< 1乘以低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù),。

關(guān)于微生物限度檢測(cè)--結(jié)果判斷

  氧菌總數(shù)是指胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的總菌落數(shù)(包括真菌菌落數(shù)),；霉菌和酵母菌總數(shù)是指沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的總菌落數(shù)(包括細(xì)菌菌落數(shù)),。若因沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌使霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)結(jié)果不符合微生物限度要求,可使用含抗生素(如氯霉素、慶大霉素）的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或其他選擇性培養(yǎng)基(如玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）進(jìn)行霉菌和酵母菌總數(shù)測(cè)定,。使用選擇性培養(yǎng)基時(shí),，應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。若采用MPN法,測(cè)定結(jié)果為需氧菌總數(shù),。 

各品種項(xiàng)下規(guī)定的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)解釋如下: 

10cfu：可接受的最大菌數(shù)為20; 

100cu：可接受的最大菌數(shù)為200;

1000f：可接受的最大菌數(shù)為2000,， 依此類(lèi)推。 

若供試品的需氧菌總數(shù),、霉菌和酵母菌總教的檢查結(jié)果均符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定,，判斷供試品符合規(guī)定；若其中任何一項(xiàng)不符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定,，判供試品不符合規(guī)定,。

關(guān)于微生物限度檢測(cè)--純化水微生物限度檢測(cè)

Q:純化水微生物限度檢測(cè)方法？