每一個(gè)實(shí)驗(yàn)新手們剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室操作細(xì)胞,，都是緊張興奮又手忙腳亂,，就從最基本的養(yǎng)細(xì)胞來說，大家剛開始一定覺得理論知識看起來很容易,，但是,，在實(shí)際情況中一般是這樣的——“到底怎么回事，細(xì)胞長不好/細(xì)胞又死了/又污染了......"
這時(shí),，如果有一份靠譜的細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)總結(jié),，或許可以幫助你少走彎路，今天就為大家分享一下由我們實(shí)驗(yàn)室總結(jié)的細(xì)胞培養(yǎng)過程中的知識總結(jié),，讓你事半功倍。
首先,，我們來看看,，什么是細(xì)胞培養(yǎng)：
細(xì)胞培養(yǎng)是指細(xì)胞在體外的培養(yǎng)技術(shù)，即在無菌條件下,，從機(jī)體中取出組織或細(xì)胞,，模擬機(jī)體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件，讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存,、生長和繁殖的方法,。通過細(xì)胞培養(yǎng)我們可以獲得大量的、性狀相同的細(xì)胞,，以便于研究細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu),、化學(xué)組成及功能和機(jī)制。
細(xì)胞真的很脆弱,，就像小嬰兒一樣,，需要你無微不至的關(guān)懷。
培養(yǎng)細(xì)胞之前,，你需要做好這些準(zhǔn)備：
1,、耗材的處理、
玻璃器皿的清洗，對于玻璃器皿(細(xì)胞瓶,、裝營養(yǎng)液的瓶子,、小青霉素瓶等)要用洗衣粉刷干凈(注意死角)，然后沖干凈,。用酸液浸泡24 h以上,，之后用清水沖洗數(shù)遍，除去殘留酸液,。瓶子之類,，沖洗過程要使勁搖晃。
2,、試劑的配置
試劑配置,，細(xì)胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意pH值的調(diào)節(jié),。
3,、無菌檢驗(yàn)
無菌檢驗(yàn)，主要采用過濾除菌：如胰酶,、抗生素,、G-418溶液、各類培養(yǎng)基,、丙酮酸鈉,、谷氨酰胺等。有些可以采用高壓滅菌：如PBS,、D-Hank's等,。
不同細(xì)胞對培養(yǎng)基的要求是不同的，要根據(jù)自己的細(xì)胞要求使用,。
細(xì)胞培養(yǎng)中最重要的步驟——無菌操作
實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,，超凈臺以紫外燈照射30分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作臺面,，并開啟超凈工作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后,，才開始實(shí)驗(yàn)操作。
每次操作只處理一株細(xì)胞株,，避免細(xì)胞間交叉污染,。
實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺,，再次以70%ethanol擦拭無菌操作臺面,。實(shí)驗(yàn)用品以70%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無菌區(qū)域,，一般不要再邊緣區(qū)域操作,。
細(xì)胞培養(yǎng)后期——定期觀察
你最好做到每天都去探望探望它們,，看看他們的成長情況
1、檢查培養(yǎng)液顏色與透明度的變化,，顏色變黃,，說明PH值下降;變紅或紫紅色，說明PH值上升,，細(xì)胞生長停滯,、死亡，一般生長穩(wěn)定的細(xì)胞2-3天換液一次,，生長緩慢的細(xì)胞可3-4天換液一次,。
2、觀察細(xì)胞生長狀態(tài),，細(xì)胞長滿瓶底的80%,，應(yīng)及時(shí)傳代。
3,、觀察細(xì)胞形態(tài)變化,，細(xì)胞透明度大、折光性強(qiáng),、輪廓清晰為佳,。
4、注意微生物污染,，常常出現(xiàn)培養(yǎng)液混濁,，液體內(nèi)漂菌絲或細(xì)胞菌，不僅僅指微生物,，包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物及細(xì)胞,。
細(xì)胞培養(yǎng)之——污染篩查
你培養(yǎng)的細(xì)胞被污染了，無非是下面幾個(gè)污染途徑：
1,、空氣是微生物傳播的最主要途徑,，操作時(shí)盡量避免說話,、咳嗽,、打噴嚏;
2、使用的培養(yǎng)器械及器皿清洗消毒不干凈;
3,、培養(yǎng)兩種以上細(xì)胞時(shí),，操作不規(guī)范，可能導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染;
4,、血清有問題,，可能血清在生產(chǎn)時(shí)就已經(jīng)被支原體或病毒污染;
5、原代培養(yǎng)的污染多數(shù)來源于組織樣本,。
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