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超速離心機的超速離心機的離心方法

時間:2023/6/5閱讀:1160
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   這種方法是選擇不同轉(zhuǎn)速的離心,分別分離各個不同組分,。例如先用低速沉降大顆粒和上清液,,在高速離心上清沉降中等顆粒,超速離心上清沉降小顆粒,。采用逐級提高離心力分離上情液的方法,,把不同大小的顆粒分開。
  這種方法比較簡單,,方便,。分離的組份沉到管底,因此可以迅速濃縮所要的組份,,減少體積,。但回收率和純度是有矛盾的,要提高回收率,,勢必提高轉(zhuǎn)速或延長離心時間,,這樣大小相近的顆粒也會沉到管底。因此該法多用于粗提純或初步濃縮樣品。本法是將樣品放在一個連續(xù)的密度梯度液體上,,通過離心,,大顆粒沉降快,小顆粒沉降慢,。經(jīng)過一段時間,,相同的顆粒就在同一深度形成一條帶子,因此把各種組份分開來,。它適用于分離密度相同,、而大小不同的物質(zhì),如不同的蛋白質(zhì)組份密度都差不多,,但分子量不一樣,,用本法很容易將其分開。但對密度不同,、大小類似的物質(zhì)則不易分離,。
  蔗糖梯度是一種常用的介質(zhì)。用不同濃度的蔗糖溶液(5%-60%)配成梯度,,用于梯度離心,。再分別進(jìn)行收集處于不同區(qū)帶里的各個組份。這是靜力學(xué)的方法,。在離心管中形成一個液體梯度,,在離心時各組份以不同的速度下沉,但終停留在與自己相同的密度中,,形成一條狹窄的平衡帶,,并保持相對的穩(wěn)定。為了使樣品所有組份都能達(dá)到它們的平衡位置,,需要長時間離心,。這種方法適用于分離大小相似但密度不同的物質(zhì),如核酸的分離,。氯化銫梯度是常用于平衡離心的介質(zhì),,分辨率很高,可區(qū)別密度相差0.05的組分,,但離心時間需十幾到幾十小時,,且價格很貴。已有一種商品名叫Percoll的聚蔗糖溶液可以代替氯化銫梯度,。該介質(zhì)能迅速形成梯度,,使離心時間大大縮短到1-2h而仍有很好的分離效果。并且有配套的標(biāo)記珠(Density marker beads)可以測定樣品的密度,。

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