您好, 歡迎來到化工儀器網
產品簡介
詳細介紹
【作用與用途】
用于血液,、血球粉,、淋巴結、脾臟,、扁桃體中非洲豬瘟病毒核酸的檢測,。
【注意事項】
1 實驗室應至少分三個區(qū)：樣品處理區(qū)、反應混合物配制區(qū)和檢測區(qū),。
2 各區(qū)物品均為,，不得交叉使用，避免污染,。檢測結束后,，應立即對工作臺進行清潔。
3 Buffer A有很強的腐蝕性,，切勿沾到皮膚或衣服上,，否則應立即用大量清水沖洗并擦干。
4 在整個檢測過程中應注意避免交叉污染：提取核酸時應用滅菌的鑷子夾取離心管,；對離心管開蓋時應避免粘在手上或濺出,，否則要立即更換手套。
5 反應液在使用前要*融化,，并將反應液與Taq酶瞬時離心將液體甩至管底,。分裝反應液時，應盡量避免產生氣泡,。上機前注意檢查各反應管是否蓋緊,，以免熒光物質泄露污染儀器。
6 陽性對照在吸取前應在微量漩渦振蕩器上劇烈振蕩1～2 sec,。
7 試劑盒中各組分應避免反復凍融,。
8 對樣品及其廢棄物的操作應嚴格遵守生物安全規(guī)定。
9 本試劑盒僅供獸醫(yī)及相關專業(yè)人士使用。
【貯藏與有效期】 非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒的A盒室溫保存,，B盒在-20℃保存,，有效期為12個月。
【規(guī)格】 48T檢測/盒
【用法與判定】
1 用法
1.1 樣品處理
血液樣品直接用,；淋巴結,、脾臟、扁桃體樣品,，用無菌的剪刀和鑷子剪取待檢樣品2.0 g于研缽中充分研磨,，再加10.0 mL PBS（pH 7.2，含1萬單位青霉素和1萬單位鏈霉素）混勻（樣品不足2.0 g按1:5比例加PBS）,，對處理的待檢樣品置70℃,，30 min滅活后，3 000 r/min,，4 ℃離心5 min,，取上清液，編號備用,；血球粉處理同上,，只不過省掉研磨步驟。
1.2 樣品存放
采集或處理好的樣品在2℃～8℃條件下保存應不超過24 h,；若需長期保存,，須放置-80 ℃冰箱，但應避免反復凍融（凍融不超過3次）,。
1.3 操作步驟
1.3.1 病毒DNA的提?。ㄊ褂肁盒）
（1）待檢樣品、陽性對照和陰性對照的份數總和用n表示,，取n個滅菌的1.5 mL離心管,，逐管編號,。
（2）每管加入Buffer A 500 mL,。
（3）每管分別加入已處理的待檢樣品、陽性對照,、陰性對照各200 mL,，充分混勻，室溫放置10分鐘,。
（4）取與上述離心管等量的DNase-Free吸附柱和收集管,，編號。將離心管中的溶液轉移至DNase-Free吸附柱,，（為避免堵塞吸附柱,，盡量不要吸懸浮雜質）。
（5）13000 r/min室溫離心30 sec,。
（6）棄去收集管液體,，將吸附柱放回收集管中,。
（7）吸附柱內加入600 μL Buffer B，13000 r/min離心30 sec,。
（8）棄去收集管液體,，將吸附柱放回收集管中。
（9）重復步驟（7）,，（8）,。
（10）13000 r/min空柱離心2 min，去除殘留液,。
（11）將每個吸附柱分別移入新的1.5mL離心管中,，向柱*加入50 μL Buffer C，室溫靜置1 min,，13000 r/min離心30 sec,，離心管中液體即為模板DNA。獲得的DNA溶液,，冰上保存?zhèn)溆茫ㄗ⒁馓崛〉腄NA須在2 h內進行PCR 擴增,，若需長期保存須
放置-80 ℃冰箱，但應避免反復凍融）,。
1.3.2 熒光PCR擴增（使用B盒）
（1）從試劑盒中取出熒光PCR反應液,、Taq酶，室溫融化后,，2 000 r/min離心5 sec,。設所需PCR管數為n（n = 樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照），每個測試反應體系需要20 μL 熒光PCR反應液和0.5 μL Taq酶,。計算好各試劑的使用量,，加入一適當體積小管中，充分混合均勻后,，向每個PCR管中各分裝20 μL,。
（2）分別向上述PCR管中加入1.3.1（11）中制備的DNA溶液各5μL，蓋緊管蓋,，500 r/min 離心30 sec,。
（3）將加樣后的PCR管放入熒光PCR檢測儀內，作好標記,。反應參數設置：
階段,，預變性95℃/3 min；第二階段,，95℃/15 sec,，52℃/10 sec，60℃/35 sec共45個循環(huán)。熒光收集在第二階段每次循環(huán)的60℃延伸時進行,。
2 判定
2.1 結果分析條件的設定
閾值設定原則：根據儀器噪聲情況進行調整,，以閾值線剛好超過陰性對照品擴增曲線的較高點為準。對于多通道熒光PCR儀,，選定FAM(465-510)檢測通道讀取檢測結果,，ABI儀器選擇FAM無熒光淬滅基團。
2.2 質控標準
2.2.1 陰性對照無Ct值并且無擴增曲線,。
2.2.2 陽性對照的Ct值應小于等于28,，并出現典型的擴增曲線。
2.2.3 如陰性和陽性對照不滿足以上條件,，此次實驗視為無效,。
2.3 結果判定
2.3.1 陰性：無Ct值，且無特征性擴增曲線,，表明樣品為陰性,。
2.3.2 陽性：Ct值≤38.0，且出現典型的擴增曲線,，表示樣品為陽性,。
2.3.3 Ct值大于38.0，且出現典型的擴增曲線的樣品建議復驗,。復驗仍出現上述結果的,，判為陽性，否則判為陰性,。
森康非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒
森康非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒