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使用凍存管儲(chǔ)存樣本時(shí)，嚴(yán)格要求應(yīng)把凍存管放入液氮的氣相層或冰箱中保存！如果凍存管儲(chǔ)存于液氮液體中,，液氮有一定幾率會(huì)滲入凍存管內(nèi)部,，復(fù)蘇時(shí)液氮?dú)饣瘜?dǎo)致管內(nèi)外壓力不平衡,，這樣極易造成凍存管的炸裂,，并具有生物危害性。

操作凍存管復(fù)蘇,，全程使用安全防護(hù)設(shè)備,，建議穿實(shí)驗(yàn)服、戴棉質(zhì)手套且在安全的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上進(jìn)行操作,。條件允許情況下,，請(qǐng)佩戴護(hù)目鏡或防護(hù)面罩。由于夏季室內(nèi)溫度會(huì)高于冬季,，請(qǐng)格外小心,。

凍存細(xì)胞儲(chǔ)存過程中,，凍存管的冷凍溫度須均勻。不均勻的受凍將會(huì)導(dǎo)致冰塞的產(chǎn)生,，冰塞會(huì)抑制兩側(cè)的液體溫度傳遞進(jìn)而產(chǎn)生危險(xiǎn)的高壓力并導(dǎo)致凍存管受損,。

凍存的樣本量不要超過凍存管要求的工作體積。

凍存管使用不當(dāng),， 會(huì)有爆,、生物安全威脅及人身傷害等風(fēng)險(xiǎn)。

細(xì)胞凍存流程

用預(yù)熱過的 PBS 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行沖洗,，棄去 PBS 后,，加入含 EDTA的胰酶消化液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消（薄地覆蓋表面即可，濃度須 根據(jù)不同的細(xì)胞系進(jìn)行調(diào)整）,。37 ℃消化 細(xì)胞 3–5分鐘,，不可過度消化。一旦細(xì)胞從底部脫離,，即可用含血清培養(yǎng)基終止消化并吸管輕吹打以重懸細(xì)胞 ,。離心細(xì)胞重懸液，棄上清,。用適當(dāng)體積含血培養(yǎng)基 重懸細(xì)胞,。將細(xì)胞重懸液以 1:11 比例與凍存液 進(jìn)行混合后轉(zhuǎn)移至凍存管中。細(xì)胞的濃度應(yīng)為 1–5 ×106 細(xì)胞 /ml,。含有細(xì)胞的凍存管須按照1度/min的冷卻速率進(jìn)行凍,。將凍存管插在含異丙醇的凍存盒小室并放置在 -70 ℃的冰箱中可以實(shí)現(xiàn)上述要求。如果凍存液中含有其他類型的樣品時(shí),，則需要將凍存管在 .20 ℃,，-70 ℃或者液氮的氣相層進(jìn)行直接凍存。