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凍存管的使用是一門學問,，并不是打開液氮罐,、放入凍存管,、關上液氮罐這樣簡單的三部曲可以完成的,?？茖W正確地使用凍存管,，可以避免樣本的損失，并保護試驗人員的安全,。

凍存管：冷凍步驟

用預熱的PBS溶液洗滌細胞,，吸取溶液，含有胰蛋白酶和EDTA的溶液覆蓋細胞（薄薄的液層足夠,，胰蛋白酶和EDTA的濃度需要根據(jù)細胞系確定）,。

37℃孵育細胞3-5分鐘。

細胞從底部脫離之后,，終止孵育,，加入含有血清的培養(yǎng)基，用移液器輕輕地懸浮細胞,。

離心細胞懸液（500 x g, 5分鐘）,，用含有血清的培養(yǎng)基重新懸浮。

細胞計數(shù),。

離心細胞懸液（500 x g, 5分鐘）,，去除上清液，用適量體積的含有血清的培養(yǎng)基重新懸浮細胞,。

以1:1體積比混合細胞和凍存液（60%培養(yǎng)基,，20%胎牛血清，20% DMSO）,，然后轉移到Cryo.sTM凍存管中,。凍存的細胞密度為 1-5×106 個/毫升,。

含有細胞的Cryo.sTM凍存管建議以−1 K / min 的速率降溫，可以將凍存管置于−70℃含有異丙醇的容器中,。如果Cryo.sTM凍存管存儲其他樣品,，可以直接放置在−20℃，−70℃或者液氮的氣相,。為了確保樣品冷凍均勻,，4 mL和5 mL的Cryo.sTM凍存管需要先置于在−20℃冰箱過夜，然后再轉移到−70℃或者液氮的氣相,。

然后轉移Cryo.sTM凍存管到液氮罐,。為了避免污染（如支原體）和安全考慮，請將Cryo.sTM凍存管置于液氮的氣相,，切勿置于液相,。