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雙熒光素酶檢測(cè)實(shí)驗(yàn)（檢測(cè)分子互作）

熒光素（Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱(chēng),，其中螢火蟲(chóng)熒光素 F-Luciferase 和海腎熒光素 R-Luciferase *有代表性。

研究者利用熒光素酶開(kāi)發(fā)出一套極其靈敏且使用方便 的基因報(bào)告系統(tǒng),。目前,，雙熒光素酶通常是指螢火蟲(chóng)熒光素酶和海腎熒光素。這兩種酶的主要區(qū)別：1. 物種來(lái)源不同,；2. 它們的底物和輔因子不同,；3. 發(fā)光的顏色不同,。

螢火蟲(chóng)螢光素酶是一種胞內(nèi)蛋白，從甲蟲(chóng)（Photinus pyralis）中分離得到,，大小為61KDa,。在氧氣、ATP和鎂離子同時(shí)存在的條件下,，催化底物螢火蟲(chóng)螢光素氧化,，生成氧化螢光素，并發(fā)出黃綠色光,，其*發(fā)光波長(zhǎng)為560nm,。

海腎螢光素酶也是一種胞內(nèi)蛋白，從海腎（Renilla reniformis）中分離,，大小為36KDa,。只需要氧氣就可以催化腔腸素，氧化生成高能產(chǎn)物coelenteramide,，并發(fā)出藍(lán)光,，其*發(fā)光波長(zhǎng)為465nm。

因此,，正是由于這兩種酶的底物和發(fā)光顏色不同,，所以在雙報(bào)告實(shí)驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用。

雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)優(yōu)勢(shì)

單報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)往往會(huì)受到各種實(shí)驗(yàn)條件的影響,，而雙報(bào)告基因則通過(guò)共轉(zhuǎn)染的“對(duì)照"作為內(nèi)參為試驗(yàn)提供一基準(zhǔn)線(xiàn),，從而可以避免細(xì)胞活性和轉(zhuǎn)染效率等外在因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，使得數(shù)據(jù)結(jié)果更為可信,。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)常用的載體有兩種策略,。第一種是兩種熒光素分別位于兩個(gè)載體上，第二種是兩種熒光素酶位于同一個(gè)載體上,。

目前,，這一系統(tǒng)被廣泛用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)與啟動(dòng)子活性分析、RNA 降解,、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),、藥物篩選、動(dòng)物活體成像等領(lǐng)域,。pGL3-Basic 質(zhì)粒用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)與啟動(dòng)子活性分析,；psiCHECK2 質(zhì)粒用于 miRNA 與其靶點(diǎn)相關(guān)分析。