RWPE-1 人正常前列腺上皮細胞

產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品編號：KMCC-001-0066

細胞名稱：RWPE-1 人正常前列腺上皮細胞

英文名稱：Human Normal Prostate Epithelial Cells

別稱：RWPE1，RWPE 1

種屬來源：人

組織來源：前列腺正常細胞

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基：K-SFM + 0.05 mg/ml BPE + 5 ng/ml EGF+ 1% PS（a. 細胞在無血清培養(yǎng)體系中培養(yǎng),，其貼壁能力較弱,，建議傳代后靜置24小時再進行后續(xù)操作。b. 細胞密度建議保持在4萬~ 7萬cells/cm2,，接種密度建議在2萬~4萬活細胞/cm2,。c. 使用0.05%胰酶消化細胞。同時由于K-sfm為無血清培養(yǎng)液無法終止胰酶消化,，所以消化完成后要通過添加2%FBS（用D-PBS稀釋）或等體積的0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化并離心去除胰酶,，再進行后續(xù)操作）

生長條件：氣相：95%空氣、5%二氧化碳,；溫度：37℃,；濕度：70~80%

傳代方法：1:2至1:3，每周 2~3次

凍存條件：采用細胞凍存液,，梯度降溫,，液氮儲存

細胞用途：僅供研究之用

一位54歲白人男性的正常前列腺組織切片的周圍區(qū)域的上皮細胞用單拷貝的人乳頭瘤病毒18（HPV-18）進行轉(zhuǎn)化，建立了RWPE-1,。據(jù)報道,，RWPE-1細胞在三維Matrigel培養(yǎng)時，在雄激素刺激下,，形成腺胞（acini）并向培養(yǎng)基中分泌PSA,。當與Matrigel或基質(zhì)細胞混合注射雄性裸鼠時，RWPE-1細胞也能形成腺胞并產(chǎn)生PSA,。來源于RWPE-1的細胞用Kirstin鼠肉瘤病毒（Ki-MuSV）轉(zhuǎn)染Ki-ras基因,，建立了能成瘤的RWPE-2細胞和 RWPE2-W99細胞。另外,，用MNU處理RWPE-1,，建立了一系列模擬前列腺癌進程中不同時期的成瘤細胞株。它們分別是WPE1-NA22, WPE1-NB14, WPE1-NB11和 WPE1-NB26細胞,。據(jù)報道,，RWPE-1細胞經(jīng)過檢測后發(fā)現(xiàn)乙肝病毒、丙肝病毒和人免疫缺陷病毒都呈陰性。PCR證實該細胞系HPV病毒DNA序列呈陽性,。每個批次均通過本庫支原體檢測,，結(jié)果陰性。在我?guī)焱ㄟ^STR鑒定,，數(shù)據(jù)上94%吻合,。STR結(jié)果如下：D5S818: 12,15；D13S317: 8,14,；D7S820: 10,11,；D16S539: 9,11；vWA: 18,；THO1: 8,9.3,；Amelogenin: X,Y；TPOX: 8,11,；CSF1PO: 13

產(chǎn)品編號：KMCC-001-0056

細胞名稱：T84 人結(jié)腸腺癌肺轉(zhuǎn)移細胞

英文名稱：Human colon adenocarcinoma lung metastasis cells

別稱：T-84,，T 84

種屬來源：人

組織來源：結(jié)直腸癌 取材轉(zhuǎn)移灶： 肺

細胞形態(tài)：上皮細胞，多角形

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基：DMEM/F12 培養(yǎng)基＋5% FBS ＋1% P/S（生長時,，這株細胞應維持高密度生長,，至少1/4滿）

生長條件：氣相：95%空氣、5%二氧化碳,；溫度：37℃,；濕度：70~80%

傳代方法：1:2至1:3，每周 2~3次

凍存條件：細胞凍存液：95% *培養(yǎng)液 + 5% DMSO,，梯度降溫，液氮儲存

細胞用途：僅供研究之用

產(chǎn)品編號：KMCC-001-0053

細胞名稱：RD 人橫紋肌肉瘤細胞

英文名稱：Human Rhabdomyosarcoma Cells

別稱： R D,，RD-2,，RD 2，130T,，130-T,，130 T，TE-32,，TE 32,，TE32，TE 32.T,，Te 32.T,，人惡性胚胎橫紋肌瘤細胞

種屬來源：人

組織來源：肌肉，橫紋肌肉瘤

細胞形態(tài)：紡錘形和大的多核細胞

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基：89% DMEM 培養(yǎng)基 + 10% FBS + 1%雙抗

生長條件：氣相：95%空氣,、5%二氧化碳,；溫度：37℃；濕度：70~80%

傳代方法：1:2至1:3，每周 2~3次

凍存條件：采用細胞凍存液,，梯度降溫,，液氮儲存

細胞用途：僅供研究之用

細胞培養(yǎng)操作

1. 凍存細胞的復蘇

1.1 在超凈臺中取配好的*培養(yǎng)液5ml到15ml離心管中放至室溫備用。

1.2 快速將干冰或液氮保存的細胞株,，放入37℃的水浴鍋后不?；蝿觾龃婀埽蛊浣鈨霾⑦_到37℃,，此過程盡量保持在3分鐘內(nèi)完成,。（備注：此處注意，管身或管內(nèi)的液氮揮發(fā)完后才可放入,，否則有炸裂風險）

1.3 將化凍的細胞液快速轉(zhuǎn)移至上述準備好培養(yǎng)基中,，1000rpm 、4min離心收集細胞并傳代,，傳代方法如下：

2. 細胞傳代處理

2.1 待長滿瓶底至80%以上時,，貼壁細胞棄掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用1X PBS洗兩遍,。

2.2 加1mL 0.25%的胰酶溶液,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-3分鐘，直至看到有細胞從瓶底上脫落分離,。

2.3 加入2mL*培養(yǎng)基終止消化,，輕輕吹打?qū)⑺屑毎麖呐囵B(yǎng)瓶表面吹落并轉(zhuǎn)移到離心管中，1000rpm ,、4min離心收集細胞,。

2.4 收集好的細胞用*培養(yǎng)基重懸，并輕輕吹打懸浮,，若無特別說明,，就按1:2~1:3的比例鋪新的培養(yǎng)瓶，放進培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)（每個細胞培養(yǎng)條件不同,，大部分細胞5%CO2,、37℃恒溫培養(yǎng)）。

3.細胞凍存處理

3.1 收集方法同上,，

3.2 收集好的細胞用細胞凍存液（若無特殊說明,，一般細胞凍存液成分為：10%血清+80%培養(yǎng)基+10%DMSO）懸浮，并按4℃,、1h,，-20℃、30min,，-80℃過夜,，液氮長期的溫度梯度進行保存,。

細胞功能研究相關(guān)檢測：

2D細胞培養(yǎng)和觀察

3D細胞培養(yǎng)和觀察

原代細胞分離/培養(yǎng)/鑒定

細胞增殖/毒性檢測（MTT 法/CCK8 法）

細胞凋亡檢測（AnnexinV FITC/PI雙染流式法/Tunel法）

細胞周期檢測（PI染料標記流式法）

細胞遷移/侵襲檢測（劃痕法/Transwell法）

流式細胞分選（流式細胞術(shù)）

細胞免疫熒光檢測

小管形成實驗（tube formation，體外血管生成實驗）

細胞克隆形成實驗

細胞外泌體分離與鑒定

慢病毒包裝及穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選

電生理檢測

個性化細胞實驗（藥物篩選等）

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