A2780 人卵巢癌細(xì)胞

細(xì)胞名稱：A2780 人卵巢癌細(xì)胞

英文名稱：Human Ovarian Cancer Cells

種屬來源：人

組織來源：卵巢

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)基：89% RPMI-1640培養(yǎng)基 + 2mM 谷氨酰胺 + 10% FBS + 1%雙抗

生長(zhǎng)條件：氣相：95%空氣,、5%二氧化碳,；溫度：37℃,；濕度：70~80%

傳代方法：1:2至1:4，每周 2~3次

凍存條件：細(xì)胞凍存液：80%培養(yǎng)基 + 10%血清 + 10%DMSO,，梯度降溫,，液氮儲(chǔ)存

細(xì)胞用途：僅供研究之用

細(xì)胞名稱：CHO-K1 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞亞株

英文名稱：Chinese Hamster Ovary Cells

英文名稱：CHO K1，CHOK1,，CHO cell clone K1,，GM15452

種屬來源：中國(guó)倉(cāng)鼠

組織來源：卵巢

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)基：89% F12K培養(yǎng)基(SIGMA,貨號(hào)N3520，添加NaHCO3 2.5g/L)+ 10% FBS + 1%雙抗

生長(zhǎng)條件：氣相：95%空氣,、5%二氧化碳,；溫度：37℃；濕度：70~80%

傳代方法：1:2至1:3,，每周 2~3次

凍存條件：細(xì)胞凍存液：80%培養(yǎng)基 + 10%血清 + 10%DMSO,，梯度降溫，液氮儲(chǔ)存

細(xì)胞用途：僅供研究之用

細(xì)胞名稱：SK-OV-3 人卵巢癌細(xì)胞

英文名稱：Human Ovarian Cancer Cells

別稱：SKOV-3,，SKOV3，Skov3,，SKO3

種屬來源：人

組織來源：卵巢腺癌,，腹水轉(zhuǎn)移

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)基：89% McCoy's 5A培養(yǎng)基 + 10% FBS + 1%雙抗

生長(zhǎng)條件：氣相：95%空氣,、5%二氧化碳；溫度：37℃,；濕度：70~80%

傳代方法：1:2至1:3,，每周 2~3次

凍存條件：細(xì)胞凍存液：80%培養(yǎng)基 + 10%血清 + 10%DMSO，梯度降溫,，液氮儲(chǔ)存

細(xì)胞用途：僅供研究之用

細(xì)胞培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中,，加入約8 mL培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

注意：a) 該細(xì)胞貼壁較慢,，建議復(fù)蘇、傳代后讓細(xì)胞貼壁48-72h后再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作,。 b) 使用0.25%(w/v) Trypsin-0.53 mM EDTA消化細(xì)胞,。 c) MCF7是一種生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞系，它會(huì)以松散的三維團(tuán)簇的形式出現(xiàn),，并伴有一些漂浮的活細(xì)胞,。懸浮的活細(xì)胞可以通過離心后重新加入到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。在復(fù)蘇后前二代該細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)貼壁緩慢的情況,，是正?，F(xiàn)象。松散的三維團(tuán)簇細(xì)胞慢慢會(huì)擴(kuò)散形成一個(gè)扁平的單層細(xì)胞,。如果生長(zhǎng)速度比正常情況慢,，可以嘗試另一批FBS（即血清批次的促生長(zhǎng)能力可能不同）。此外,，將血清濃度增加到20％也可能有助于改善生長(zhǎng),。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

a,、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞,，棄去消化液,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

c,、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中,，1000 rpm離心4 min,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。

d,、將細(xì)胞懸液按1：2~3比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例,；

a,、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液，用PBS清洗一遍,，棄盡PBS,，加 1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),。

b,、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL,，輕輕混勻,，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。

c,、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞破碎形成碎片,，是正?，F(xiàn)象。貼壁細(xì)胞可以消化,，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清,。加5 mL PBS重懸細(xì)胞,，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，,，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),。

4. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng),。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時(shí)可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,。

5. 建議客戶收到細(xì)胞后，前3天各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決,。

6. 該細(xì)胞僅供科研使用,。

上海昆盟生物科技有限公司 (Coweldgen Scientific Co.,LTD) 是一家專注于生命科學(xué)領(lǐng)域提供相關(guān)試劑產(chǎn)品和服務(wù)的生物高科技企業(yè)，坐落于上海聚科生物產(chǎn)業(yè)園,。公司提供種類齊全的細(xì)胞系和多種原代細(xì)胞,、質(zhì)量穩(wěn)定的細(xì)胞培養(yǎng)試劑產(chǎn)品、成熟高效的技術(shù)服務(wù),。本著“守正創(chuàng)新,，科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)"的理念，我們以高標(biāo)準(zhǔn)塑造行業(yè)品牌,，以全新視野構(gòu)建現(xiàn)代企業(yè),，勇于探索和創(chuàng)新。公司業(yè)務(wù)范圍涉及全國(guó)各省市自治區(qū),，與國(guó)內(nèi)多家醫(yī)院,、高校、科研院所,、生物科技公司建立了良好的合作關(guān)系,，贏得了良好的市場(chǎng)聲譽(yù)和廣泛的認(rèn)可，我們保證將繼續(xù)為廣大科研用戶提供專業(yè),、高效,、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品及服務(wù)！

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