在本研究中，作者將VEGF封裝的活化中性粒細胞外泌體模擬物（aPMNEM）裝入ECM,，以開發(fā)用于治療慢性傷口的VEGF-aPMNEM-ECM,。首先對納米材料進行合成，而后驗證aPMNEM的質(zhì)量,，作者使用了TEM,，Western blotting, NTA和Zeta電位測量進行了表征。TEM和NTA結(jié)果顯示,，aPMNEM的直徑約為160nm,，與PMNExo、aPMNExo和PMNEM的大小相似,。Zeta電位測量顯示,，aPMNEM的電位約為-40 mV，與PMNExo,、aPMNExo和PMNEM的表面膜電位相似,。為了量化aPMNEM的產(chǎn)量，作者測量了由相同數(shù)量的細胞通過NTA產(chǎn)生的PMNExo,、aPMNExo,、PMNEM和aPMNEM的數(shù)量。NTA顯示,，通過多層過濾擠出生產(chǎn)的aPMNEM產(chǎn)量約為aPMNExo產(chǎn)量的10倍,。接下來，為了研究aPMNEM的質(zhì)量,，作者進行了4D無標記定量蛋白質(zhì)組學分析,，并通過主成分分析（PCA）、火山圖分析和熱圖分析比較了aPMNEM和PMNExo的蛋白質(zhì)含量,。PCA顯示aPMNEM和PMNExo蛋白含量不同。此外,，蛋白質(zhì)組學分析發(fā)現(xiàn),，與PMNExo相比,，aPMNEM中有1807種不同的蛋白質(zhì)類型具有顯著差異。與PMNExo相比,，aPMNEM中差異表達的蛋白中有1501個蛋白上調(diào)（折疊變化>2）,，306個蛋白下調(diào)（折疊變化>2）。GO注釋分析顯示aPMNEM與PMNExo具有相似的生物過程,、細胞成分和分子功能,。在殺菌相關(guān)蛋白中，中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂鈣蛋白（LCN2）,、溶菌酶（LYZ）和肽聚糖識別蛋白（PGLYRP1）上調(diào),，而補體C3（C3）、髓過氧化物酶（MPO）和補體C4-B（C4B）在PMNEM中與PMNExo相比下調(diào),。最后作者通過物理冷凍結(jié)合SDS-Triton洗脫法制備了溫度敏感的ECM水凝膠,。

為了驗證VEGF-aPMNM-ECM的生物相容性,，作者通過H&E染色法觀察這些器官的生理結(jié)構(gòu)變化,。結(jié)果顯示，與PBS處理的對照組相比，VEGF-aPMNM-ECM對SD大鼠全層皮膚創(chuàng)面模型無明顯的病理改變,，說明VEGF-aPMNM-ECM對SD大鼠全層皮膚創(chuàng)面模型無毒性作用,。同時使用了小動物體內(nèi)成像驗證VEGF - aPMNEM在創(chuàng)面的生物分布，顯示出aPMNEM在傷口部位保持48小時的功能,，并且不隨時間擴散,。

VEG為了確定ECM的組成,，作者通過進行4D無標記定量蛋白質(zhì)組學分析來分析ECM的蛋白質(zhì)含量,。在ECM水凝膠中共發(fā)現(xiàn)112種蛋白質(zhì)。生物信息學研究揭示了ECM與“細胞外成分"之間的相關(guān)性,。根據(jù)以往的研究,，那些數(shù)量較多的蛋白，如膠原I,，可使M1巨噬細胞轉(zhuǎn)化為M2巨噬細胞,。CD86 (M1巨噬細胞表面標記物)和CD206 (M2巨噬細胞表面標記物)抗體IF分析結(jié)果證實,，ECM、aPMNEM - ECM和VEGF-aPMNEM-ECM治療組顯著誘導M1巨噬細胞向M2巨噬細胞轉(zhuǎn)化,；但三組間無明顯差異,。