原代培養(yǎng)的細胞,，來源于胚胎、組織器官和外周血,，通過特殊的分離方法制備,，稱為原代細胞。初步分離得到的細胞具有與體內細胞相似的生物學特性,，是研究生進行與物體相關的生命活動的理想材料,。
原代細胞分離培養(yǎng)是從體內取出人/小鼠模型動物特異性細胞，用胰蛋白酶和螯合劑(EDTA)處理,，分散成單細胞,，并在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使得細胞能夠存活,、生長和繁殖的過程,。原代培養(yǎng)是指細胞、組織和器官直接從體內取出后立即進行培養(yǎng),。此時的細胞保持了原細胞的基本性質,，如果是正常細胞，則仍保留二倍體數(shù),。但實際上,，一代至第十代內培養(yǎng)的細胞一般稱為原代細胞培養(yǎng)。常用的原代培養(yǎng)是組織塊培養(yǎng)和分散細胞培養(yǎng),。
原代細胞分離培養(yǎng)中的注意事項：
1,、原代培養(yǎng)材料的選擇，盡量選擇繁殖能力強的組織,，如胚胎,、幼體或腫瘤組織等。
2,、注意無菌操作,。
3、整個取樣操作要迅速,，尤其是孕鼠要在乙醇中浸泡1min左右,，時間不宜過長，以保證胚胎細胞的活性,。
4,、采用消化法時，胰酶的溫度應低于37℃,，胰酶的濃度應僅為平時消化細胞濃度的一半,。因為這個過程不像細胞消化培養(yǎng)時的1~10min，而是至少20min,，一次消化的細胞在這個胰蛋白酶消化液中繼續(xù)消化10min以上,。所以胰酶不能作用太強，否則這些細胞容易受損,，不容易存活,。
5、如果采用組織塊法,，應在組織塊略干,，能貼在瓶壁上時，與培養(yǎng)液接觸,，使組織塊能浮起,。如果組織塊不貼在壁上,，細胞就不容易生長，即使生長也不貼在瓶壁上,，生長中的細胞因為無法觀察而無法收集,。
6、在原代培養(yǎng)操作中,，也可用無血清的DMEM或PBS洗滌子宮,、胚胎或組織塊等。
7,、新生乳鼠也可作為原代細胞分離培養(yǎng)的培養(yǎng)材料,。此時應將乳鼠浸泡在75%的乙醇中2~3分鐘，使皮膚充分消毒,。因為乳鼠的原代培養(yǎng)有較高的污染概率,，所以要小心處理，避免細菌污染,。乳鼠原代培養(yǎng)細胞存活率不如胚胎細胞培養(yǎng)成功率高,。
