原代心肌細(xì)胞間作為主要研究模型廣泛應(yīng)用于心血管研究,，經(jīng)過長期的嘗試，我們實驗室找到了一些行之有效的方法,，積累了一些經(jīng)驗,。總結(jié)如下：
1,、細(xì)胞分散和接種均勻度
分離出來的心肌細(xì)胞在溶液中Ca2+的作用下容易結(jié)塊,，因此，在差動貼壁前后,，應(yīng)將心肌細(xì)胞輕輕吹吹多次,，形成單一分散狀態(tài)。接種后，心肌細(xì)胞應(yīng)均勻分布在培養(yǎng)板上避免細(xì)胞聚集到培養(yǎng)孔中心另外,，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱后,，用滴管輕輕吹每個孔中心部分2~3次，但要特別注意避免污染,。
2,、成纖維細(xì)胞的抑制和血清類型的選擇
成纖維細(xì)胞比原代心肌細(xì)胞間更容易貼壁，具有分裂和增殖的能力,。差異粘附后,，少量成纖維細(xì)胞仍混合在心肌細(xì)胞中。如果處理不當(dāng),，它們很容易長成優(yōu)勢細(xì)胞溴脫氧尿苷（BrdU）會干擾細(xì)胞有絲分裂,，因此BrdU通常用于抑制成纖維細(xì)胞的生長，但如果使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞,，則很難BrdU*抑制成纖維細(xì)胞的生長,，因為胎牛血清中含有許多促有絲分裂因子，使用小牛血清可以克服這種現(xiàn)象,，獲得90%以上的心肌細(xì)胞,。
3、換液時間
觀察原代心肌細(xì)胞間形態(tài)時,，接種密度低,，貼壁心肌細(xì)胞數(shù)減少。為避免因更換溶液而丟棄有活力的心肌細(xì)胞,，接種后48小時應(yīng)更換溶液,，這樣不僅貼壁心肌細(xì)胞數(shù)量明顯增加，而且BrdU的作用時間更長,，對成纖維細(xì)胞的抑制作用更明確此外,，其與0.1g?L1BSA對心肌細(xì)胞黏附率和凋亡率無顯著影響。
4,、防污染措施
除無菌操作等常規(guī)技術(shù)方法外,，還應(yīng)特別注意以下幾點：（1）取心時避免切開消化道較安全的方法是切入劍突上肋，不涉及腹腔,，減少污染機會（2）條件允許的情況下,，新生大鼠心肌細(xì)胞不應(yīng)與其他細(xì)胞在同一培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)，以防止交叉污染（3）培養(yǎng)的心肌細(xì)胞的觀察和拍照每次時間過長,，否則不僅會改變培養(yǎng)基的pH值,，還會增加污染的概率。
