實時熒光定量pcr儀價格

 樣品到達域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為（的循環(huán)數(shù)）,。域值應(yīng)設(shè)定在使的擴增效率為大，這樣可以獲得準確,，可重復性的數(shù)據(jù),。如果同時擴增的還有標有相應(yīng)濃度的，分析將產(chǎn)生一條,，可以用來計算未知樣品的濃度,。

所謂real-time Q-PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因,，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程,，后通過對未知模板進行定量分析的方法。在 real-time 技術(shù)的發(fā)展過程中,，兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用：（1）在90年代早期,，Taq的5′活性的發(fā)現(xiàn)，它能降解特異性熒光記探針,，因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能,。（2）此后熒光探針的運用使在一密閉的反應(yīng)管中能實時地監(jiān)測反應(yīng)全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運用,。

實時熒光定量pcr儀價格

 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA是呈指數(shù)方式增加的,，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板,，從而進入,。在傳統(tǒng)的PCR 中,，常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的終擴增產(chǎn)物，因此用此對PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處,。在real-time Q-PCR中,，對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴增相關(guān)的熒光信號，隨著反應(yīng)時間的進行,，監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲 線,。在PCR反應(yīng)早期，產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別,，而后熒光的產(chǎn)生進入指數(shù)期、線性期和終的平臺期,，因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點 上來檢測PCR產(chǎn)物的量,，并且由此來推斷模板初的含量。為了便于對所檢測樣本進行比較,，在real-time Q-PCR反應(yīng)的指數(shù)期,，首先需設(shè)定一定熒光信號的域值，一般這個域值（threshold）是以PCR反應(yīng)的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號 （）,，熒光域值的缺省設(shè)置是3～15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍,。如果檢測到熒光信號超過域值被認為是真正的信號，它可用于定義 樣本的域值循環(huán)數(shù)（Ct）,。的含義是：每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達到設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù),。研究表明，每個模板的Ct值與該模板的起始的 存在,，起始拷貝數(shù)越多,，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的可作出,，因此只要獲得未知樣品的Ct值,，即可從標準曲線上計算出該樣 品的起始拷貝數(shù)。