DNA提取試劑盒的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/div>
1,、掌握PCR法擴(kuò)增目的基因片段的基本原理與方法；
2,、通過PCR驗(yàn)證目的基因片段是否插入質(zhì)粒中,；
3、充分理解本學(xué)期三次分子實(shí)驗(yàn)的原理,、聯(lián)系與意義,。
實(shí)驗(yàn)原理：
分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)基本原理：
PCR即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是指在DNA聚合酶催化下,，以母鏈DNA為模板,，以特定引物為延伸起點(diǎn),，通過變性、退火,、延伸等步驟,，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過程。是一項(xiàng)DNA體外合成放大技術(shù),，能快速特異地在體外擴(kuò)增一定長度的DNA片段,。可用于基因分離克隆,，序列分析,，基因表達(dá)調(diào)控，基因多態(tài)性研究等許多方面,。
在高溫（94℃）下,，待擴(kuò)增的靶DNA雙鏈?zhǔn)軣嶙冃猿蔀閮蓷l單鏈DNA模板；而后在低溫（37～55℃）情況下,，兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補(bǔ)的單鏈DNA模板結(jié)合,，形成部分雙鏈；在普通Taq酶的最適溫度（72℃）下,，以引物3’端為合成的起點(diǎn),，以d NTP為原料，沿模板以5’→3’方向延伸,，合成DNA新鏈,。這樣，每一雙鏈的DNA模板,，經(jīng)過一次解鏈,、退火、延伸三個步驟的熱循環(huán)后就成了兩條雙鏈DNA分子,。如此反復(fù)進(jìn)行,，每一次循環(huán)所產(chǎn)生的DNA均能成為下一次循環(huán)的模板，每一次循環(huán)都使兩條人工合成的引物間的DNA特異區(qū)拷貝數(shù)擴(kuò)增一倍,，PCR產(chǎn)物得以2n的形式迅速擴(kuò)增,，經(jīng)過25～30個循環(huán)后，理論上可使基因擴(kuò)增10 倍以上,。
6
立即詢價(jià)
您提交后,，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)