背景：來(lái)自移植受者循環(huán)中移植物的無(wú)細(xì)胞DNA（cfDNA）是排斥反應(yīng)的潛在生物標(biāo)志物。通過(guò)使用微陣列和供體和受體DNA的大規(guī)模平行測(cè)序,，在維持階段的心臟移植后研究了其有用性,。這些方法的缺點(diǎn)是成本高，周轉(zhuǎn)時(shí)間長(zhǎng),，需要供體DNA,。因此，我們尋求使用數(shù)字微滴PCR（ddPCR）開(kāi)發(fā)快速且經(jīng)濟(jì)有效的方法,。
方法：從肝(LTx，n=10),、腎(KTx,，n=9)和心臟(HTx，n=8)移植后的穩(wěn)定受者和7例LTx后直接入院的患者采集血漿,。已知的單核苷酸多態(tài)性具有較高的等位基因頻率,，共建立了41種水解探針?lè)治龇椒āＱ獫{cfDNA預(yù)擴(kuò)增,，然后用傳統(tǒng)的實(shí)時(shí)熒光PCR方法確定信息(異源)SNP,，然后用ddPCR對(duì)嫁接衍生cfDNA(GcfDNA)進(jìn)行定量(百分比)。
結(jié)果：平均回收率為94%(SD,，13%),，不精密度為4%~14%。緩解組GcfDNA分別為＜6.8%(LTx),、＜2.5%(KTx)和＜3.4%(HTx),。在LTx當(dāng)天，GcfDNA大約為90%,，到第10天,，無(wú)并發(fā)癥LTX接受者的GcfDNA為＜15%。在2例經(jīng)活檢證實(shí)的排斥反應(yīng)患者中,，GcfDNA升高到60%,，而在1例膽汁淤積癥患者中未發(fā)現(xiàn)GcfDNA升高。
結(jié)論：開(kāi)發(fā)了一種新的,、經(jīng)濟(jì)有效的,、快速的技術(shù)來(lái)定量移植受者的GcfDNA,。這項(xiàng)技術(shù)體現(xiàn)了一種有希望的、潛在的通用生物標(biāo)記物,，用于早期檢測(cè)排斥反應(yīng),，這可能使更有效的治療干預(yù)成為可能。
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