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孵育盒在免疫印跡實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用
閱讀：426 發(fā)布時(shí)間：2022-10-25
孵育盒采用物理分隔的方式將膜分格成小室,，對(duì)應(yīng)待孵育抗體通過(guò)注液孔直接注入小室孵育,，不需要額外的孵育盒或者雜交袋，更免去剪膜和反復(fù)做記號(hào)的麻煩,，可整張膜進(jìn)行免疫印跡實(shí)驗(yàn),，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果更完整和方便。
免疫印跡實(shí)驗(yàn)是目前實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行免疫檢測(cè)常用的實(shí)驗(yàn)方法之一,。與ELISA實(shí)驗(yàn)方法相比,，免疫印跡實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)流程更繁瑣，工作量更大,，如果對(duì)多個(gè)樣品同時(shí)進(jìn)行檢測(cè),，通常是將轉(zhuǎn)印之后的膜一條條剪下，分別放入對(duì)應(yīng)的一抗小孵育盒子或者雜交袋,；漂洗之后再分別加入對(duì)應(yīng)的二抗分別孵育,；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要在每張膜條上做標(biāo)記，其工作量相當(dāng)大,，一旦標(biāo)記錯(cuò)誤或記錄錯(cuò)誤都會(huì)造成很麻煩,。
一抗孵育：
1、打開(kāi)孵育器,，將孵育器的上蓋取下,，底板放平，適當(dāng)調(diào)整膠墊位置處于中間位置,，并用封閉液將膠墊表面潤(rùn)濕,；
2、將封閉好的整張膜（膜尺寸應(yīng)該小于膠墊尺寸）,，輕輕平鋪在膠墊上面,，從一面輕輕趕走膠墊與膜之間的氣泡；
3、將孵育器的上蓋輕輕壓在膜上,，將長(zhǎng)方形液槽一面與膜接觸,，膜上彩色Marker條帶置于對(duì)應(yīng)槽正中位置，均勻擰緊四角緊固螺絲（緊固到液孔槽加入液體不流出或者流串到其他液孔槽為宜）,，液孔槽與膜之間形成空腔液槽小室,；
4、將對(duì)應(yīng)抗體工作液分別通過(guò)對(duì)應(yīng)液槽背面任意一端的注液孔輕輕注入液槽小室,，抗體工作液一般的注入量不超過(guò)液槽小室總?cè)莘e的3／4,；5、抗體工作液注入之后可將整個(gè)孵育器平放在搖床震蕩孵育（振幅不可過(guò)強(qiáng)）,，也可以平放在合適的溫度靜置孵育,。