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細(xì)胞凍存的操作步驟是什么？
閱讀：1195 發(fā)布時(shí)間：2022-9-20
1,、配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液,；
2,、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,，去除舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗。
3,、去除PBS,，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái),；
4、離心1000rpm,，5min,；
5,、去除胰蛋白酶,，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml,；
6,、細(xì)胞分裝入凍存管中,，每管1～1.5ml；
7,、在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱(chēng),，凍存時(shí)間及操作者；
8,、凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),，可增至-5℃～-10℃/min,；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中,。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,，然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜,，取出凍存管,，移入液氮容器內(nèi),。
注意事項(xiàng)
1、從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞用于凍存,，最好為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,。在凍存前一天最好換一次培養(yǎng)液；
2,、將凍存管放入液氮容器或從中取出時(shí),，要做好防護(hù)工作,，以免凍傷；
3,、凍存和復(fù)蘇最好用新配制的培養(yǎng)液,。