顯微計數(shù)法是將一定體積的供試液濾過，使所含不溶性微粒截留在微孔濾膜上,，在100倍顯微鏡下,，用經(jīng)標定的目鏡測微尺分別測定其最長直徑在10μm以上(≥10um)和25μm以上(≥25um)的微粒，根據(jù)過濾面積上的微?？倲?shù),，計算出被檢測的供試液每1ml(或每個容器)中含不溶性微粒的數(shù)量。
1,、操作的實驗環(huán)境,、儀器和用具
(1) 實驗環(huán)境 顯微計數(shù)法不溶性微粒儀的實驗操作所處環(huán)境應不得引入外來微粒，可以在超凈室、層流凈化臺或能符合要求的潔凈實驗室中進行,。玻璃儀器和其他所需的用品都應潔凈,。顯微計數(shù)法所用微粒檢查用水(或其他適宜溶劑),，使用前須經(jīng)不大于1.0μm的微孔濾膜濾過,。
(2) 顯微鏡 雙筒大視野顯微鏡，目鏡內(nèi)附標定的測微尺(每格5～10um),。坐標軸前后,、左右移動范圍均應大于30mm，顯微鏡裝置內(nèi)附有光線投射角度,、光強度均可調(diào)節(jié)的照明裝置,。檢測時放大100倍。
(3) 鏡臺測微尺(用于目鏡測微尺的標定),。
微孔濾膜 白色,，孔徑0.45μm,、直徑25mm(或13mm)，一面印有間隔3mm的格柵,；膜上如有10μm以上(≥10um)的不溶性微粒,，應在5粒以下,，并不得有25μm以上(≥25um)的微粒，必要時,，可用微粒檢查用水沖洗使符合要求。
(4) 直徑25mm(或13mm)夾式定量濾器,。
(5) 平皿,。
(6) 平頭無齒鑷子,。
(7) 計數(shù)碼器。
2,、顯微計數(shù)法不溶性微粒儀的操作方法
(1) 供試品檢查前的準備
(2) 取50ml微粒檢查用水(或其他溶劑),，經(jīng)微孔濾膜(一般孔徑為0.45μm)濾過，置于潔凈的適宜容器中,，旋轉(zhuǎn)使可能存在的微粒均勻,，靜置待氣泡消失。按顯微計數(shù)法項下的檢查法檢查,，每50ml中含10μm以上(≥10um)的不溶性微粒應在20粒以下，含25μm以上(≥25um)的不溶性微粒應在5粒以下,。否則表明微粒檢查用水(或其他溶劑),、玻璃儀器和實驗環(huán)境不適于進行微粒檢查，應重新進行處理,，檢測符合規(guī)定后放可進行供試品檢查,。
(3) 用水沖洗平皿,，再用凈化水反復沖洗,，瀝干,，置實驗環(huán)境中備用,。
(4) 在凈化臺上，將濾器用凈化水沖洗至潔凈,，用平頭無齒鑷子夾取2.4項下符合要求的測定用微孔濾膜置濾器托架上,，用濾器夾固定濾器，倒置,，反復用凈化水沖洗濾器內(nèi)壁,，瀝干后安裝在抽濾瓶上備用。
(5) 待檢樣品應事先除去外包裝,，并用凈化水將容器外壁沖洗干凈,，置適宜實驗環(huán)境中備用。
(6) 檢查法
標示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液 除另有規(guī)定外,，取供試品,，用水將容器外壁洗凈，在層流凈化臺上小心翻轉(zhuǎn)20次,，使溶液混合均勻,，立即小心開啟容器，用適宜的方法
(7) 抽取或量取供試品溶液25ml,，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入經(jīng)預處理的濾器(濾膜直徑25mm)中,，靜置1分鐘,，緩緩抽濾至濾膜近干,，再用微粒檢查用水25ml，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入,，洗滌并抽濾至濾膜近干,，然后用平頭無齒鑷子將濾膜移置平皿上(必要時，可涂抹極薄層的甘油使濾膜平整)，微啟蓋子使濾膜干燥后,，將平皿閉合,，置顯微鏡載物臺上。調(diào)好入射光,，放大100倍進行顯微測量,，，調(diào)節(jié)顯微鏡至濾膜格柵清晰,。移動坐標軸,，分別檢測有效過濾面積上最長粒徑在大于10μm(≥10um)和25μm以上(≥25um)的微粒數(shù)。另取至少兩個供試品,，同法測定,，計算測定結(jié)果的平均值。
(8) 標示裝量為25ml以下的靜脈用注射液或注射用濃溶液 除另有規(guī)定外,，取供試品，用水將容器外壁洗凈,，在層流凈化臺上小心翻轉(zhuǎn)20次,，使混合均勻。立即小心開啟容器,，用適宜的方法直接抽取容器中的全部溶液，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入濾器(濾膜直徑13mm)中,，照上述3.2.1同法測定,。
(9) 靜脈注射用無菌粉末及供注射用無菌原料藥 除另有規(guī)定外，照光阻法檢查法3.2.3或制備供試品溶液,，同3(2)操作測定,。
3、記錄與計算
(1) 記錄 顯微計數(shù)法不溶性微粒儀的記錄應包括所用儀器型號,；供試品包裝情況,，檢驗數(shù)量；測定用濾膜處理前后微粒水平,，微粒檢查用水來源或制備情況與含微粒數(shù),。
(2) 計算 用手撳計數(shù)碼器分別統(tǒng)計濾膜上直徑10μm以上(≥10um)的微粒數(shù)，以及25μm以上(≥25um)的微粒數(shù),，計算,，即得每1ml供試品溶液(或每個容器或每份供試品)中所含10μm以上(≥10um)和25μm以上(≥25um)的不溶性微粒數(shù)。
4,、注意事項
(1) 各種形狀的微粒應以實測到的最長粒徑計算,，重疊微粒和聚合膠體微粒均以單個微粒計數(shù),；結(jié)晶析出不屬于檢測范圍，故不應計算,。
(2) 必要時另取微粒檢查用水(或其他溶劑)25ml照3.2.1項下自“沿濾器內(nèi)壁緩緩注入,，洗滌并抽濾至濾膜近干”起，依法操作,，此項空白試驗僅可視作對操作環(huán)境,、實驗用具的認證，所得數(shù)據(jù)不必在供試品檢查結(jié)果中扣除,，但對檢測結(jié)果的正確與否有密切關系,。此項試驗必須檢測全濾膜，達到3(1)的要求后方可進行樣品檢測,。
(3) 顯微計數(shù)法不溶性微粒儀檢測法不適用于乳液型和混懸型注射劑,，對于黏度過高者，光阻法和本法均無法測定時,，可用適宜的溶劑經(jīng)適量稀釋后測定,。
(4) 供試品的檢查數(shù)量：為確保檢查結(jié)果具有統(tǒng)計學意義，除另有規(guī)定外,，一般應取供試品3瓶(支)以上進行不溶性微粒檢查,。
5、結(jié)果與判定
(1) 標示裝量為100ml或100ml以上的靜脈用注射液 除另有規(guī)定外,，每1ml中含10μm以上(≥10um)的微粒不超過12粒,，含25μm以上(≥25um)的微粒不超過2粒，判為符合規(guī)定,。
(2) 標示裝量為100ml以下的靜脈用注射液,、靜脈注射用無菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無菌原料 除另有規(guī)定外,，每個供試品容器中含10μm以上(≥10um)的微粒不超過3000粒,，含25μm以上(≥25um)的微粒不超過300粒，判為符合規(guī)定,。
以上就是梓夢科技編輯部的小編介紹的詳細的關于顯微計數(shù)法不溶性微粒儀檢測法的操作教程,，如果還有很多朋友在操作中有疑問的歡迎聯(lián)系梓夢科技
