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分子生物學(xué)主要研究具體生物大分子在某一生物學(xué)行為過程中的表達變化,、功能和作用方式,;主要涉及基因的表達調(diào)控、蛋白相互作用,、信號分子間的交互對話等,。分子生物學(xué)實驗常需要我們在具體實驗前對所關(guān)注的基因的一些基本信息、可能受哪些因素調(diào)控,、與哪些分子可能存在潛在的相互作用,,可能參與哪些生物學(xué)行為等進行一些初步的判斷,,然后根據(jù)這些信息,提出合理的實驗設(shè)計,,并通過生物學(xué)實驗加以驗證,。那么,如何獲得上面的這些信息,,除了根據(jù)實驗結(jié)果提供的線索和深入研究相關(guān)文獻以外,,還會用到一些分子生物學(xué)數(shù)據(jù)庫,尤其一些在線預(yù)測工具,。下面從基因的基本信息獲取,、表達調(diào)控的生物信息學(xué)預(yù)測和基因功能分析三方面來對常用的數(shù)據(jù)庫進行簡單的介紹。
基因基本信息的獲取
1,、NCBI數(shù)據(jù)庫
NCBI(美國國家生物技術(shù)信息中心)由美國國立衛(wèi)生研究員(NIH)于1988年創(chuàng)辦,,創(chuàng)辦NCBI的初衷是為了給分子生物學(xué)家提供一個信息儲存和處理的系統(tǒng),隨著數(shù)據(jù)庫各種資源的涌現(xiàn),,現(xiàn)在已經(jīng)成為科研工作者的輔助工具了,。通過這一數(shù)據(jù)庫,我們可以獲取某一基因的核酸或蛋白質(zhì)序列,。
2,、Genecards數(shù)據(jù)庫
除了NCBI這個經(jīng)典的數(shù)據(jù)庫外,具體研究中我們還常參考其他數(shù)據(jù)庫,,重點介紹Genecards數(shù)據(jù)庫,。GeneCards是一個可搜索的綜合數(shù)據(jù)庫,它自動整合約一百多個網(wǎng)絡(luò)來源的基因的數(shù)據(jù),,包括基因組,、轉(zhuǎn)錄學(xué)、蛋白生物學(xué),、遺傳,、臨床和功能信息。它提供了各種其它數(shù)據(jù)庫的ID,,點擊ID還能夠直接鏈接到想進的數(shù)據(jù)庫,,與什么疾病有關(guān),與什么通路有關(guān),,基因的基因組學(xué),,染色體位置,蛋白質(zhì)基本信息結(jié)構(gòu)域分析,、基因功能分析等,、相關(guān)的抗體、慢病毒,、促進劑,、抑制劑,、克隆產(chǎn)品,包括細胞系,,各品牌的介紹,,以及相關(guān)的文獻信息全面。由此可見,,該數(shù)據(jù)庫是一個基因大全,,通過這個數(shù)據(jù)庫我們幾乎可以獲取目標基因的所有信息。
基因表達調(diào)控分析
1,、基因表達譜數(shù)據(jù)庫的查詢
了解基因的表達特征有助于分析其具體的表達調(diào)控機制,,除了上述的Genecards數(shù)據(jù)庫里的資源之外,NCBI中GEO Profiles數(shù)據(jù)庫也可以初步了解目標基因在特定組織中的分布特征,。除此之外,,TCGA數(shù)據(jù)庫亦可以下載不同研究的具體組學(xué)數(shù)據(jù)。
2,、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點分析
研究基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控是基因從無到有,,從少到多,或從多到少最為重要的調(diào)控方式,,是闡明基因參與生物學(xué)功能的需要,同時也為其功能研究提供重要線索,。對于某一具體基因,,我們研究分析有哪些轉(zhuǎn)錄因子可能結(jié)合到該基因的上游而調(diào)控其表達。首先第一步通過NCBI Gene檢索該基因的基因組序列信息,,在該基因的DNA信息中,,我們可以得知該基因的范圍和mRNA序列,進而獲取其轉(zhuǎn)錄起始位點,、可變剪接等信息,。轉(zhuǎn)錄起始點上游-1000bp的核酸序列,下游位置后移1000bp,,獲取目的基因啟動子序列后,,進行轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點分析,推薦使用JASPAR數(shù)據(jù)庫,,在搜索框中輸入啟動子序列的FASTA格式序列,,在左側(cè)選中所趕興趣的轉(zhuǎn)錄因子,點擊scan,,就可以獲得潛在調(diào)控該基因的轉(zhuǎn)錄因子及其識別序列的信息,。
3、啟動子甲基化分析
基因啟動子甲基化是基因沉默的重要方式,,且可隨細胞傳代而傳遞,,在細胞分化,、發(fā)育以及腫瘤演變中發(fā)揮重要作用。而CpG島的存在是發(fā)生甲基化的基礎(chǔ),,推薦尋找CpG島的在線分析軟件,。
4、miRNA調(diào)控分析
miRNA介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控是指通過其種子序列與潛在的靶分子mRNA的3’UTR上的序列結(jié)合,,抑制基因的翻譯或介導(dǎo)降解,。眾多靶基因預(yù)測軟件中,targetscan是較為方便準確的工具,,可以查找可能調(diào)控目標mRNA的候選miRNA,,也可以查找關(guān)注miRNA的可能調(diào)控mRNA。
基因功能分析
1,、蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)定位的預(yù)測
蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)的定位對于研究蛋白質(zhì)的功能非常重要,,蛋白質(zhì)可分布于細胞核、細胞質(zhì)或胞膜上,,不同亞型不同定位提示具有不同功能,。推薦一個用于蛋白質(zhì)定位預(yù)測的網(wǎng)站。
2,、同源蛋白的搜索
同源蛋白通常具有相似的功能,,因此尋找某一基因?qū)?yīng)的同源蛋白對了解該基因的功能非常有意義。通常思路是通過序列的比對推斷出這些分子的共同祖先,,然后才認為他們可能具有相似的結(jié)構(gòu)與功能,。在NCBI網(wǎng)站中進入BLAST主界面,進行相關(guān)同源蛋白的搜索,。
3,、基貼因功能分類
我們研究過程中,通常需要對一個基因參與哪些生物學(xué)功能以及具體某個生物學(xué)功能都有哪些基因參與,。這里推薦基因功能分類網(wǎng)站GO網(wǎng)站,。在上述基礎(chǔ)上,根據(jù)基因的gain-of-function和loss-of-function這些尋找基因功能的實驗學(xué)手段,,結(jié)合生物信息學(xué)方法,,提出科學(xué)的實驗思路和合理的實驗假說。
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