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原代細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑
一、產(chǎn)品詳情:
Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學(xué)舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動物細(xì)胞,、活體動物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑,,此技術(shù)成為新的全球蛋白功能、免疫細(xì)胞及干細(xì)胞治療,、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一,。Zeta Life轉(zhuǎn)染試劑可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞、懸浮細(xì)胞,,如:T細(xì)胞,、NK細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞,、THP-1等,;可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動物細(xì)胞;用于將 DNA 和 siRNA 轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞系和各種原代細(xì)胞中;轉(zhuǎn)染細(xì)胞后可10小時內(nèi)快速代謝的第三代新轉(zhuǎn)染試劑,。
二,、使用說明:
1、材料準(zhǔn)備
RNA 濃度 20 uM /L
質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul(注意:①溶解于無菌雙蒸水或超純水,;②無內(nèi)毒素 )
2,、操作步驟
提前 1 天接種細(xì)胞:細(xì)胞匯合度在 60-80%左右,再進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。
核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合,,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘,。
在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物:根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,,并輕輕混勻;細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清,。
細(xì)胞換液:轉(zhuǎn)染 24 小時后對細(xì)胞進(jìn)行正常換液,,懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。
分析結(jié)果:質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,,48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達(dá),。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選,。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,,48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。
原代細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑
三,、注意事項(xiàng):
1,、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水,但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer,。溶解于 Buffer 的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會下降 80%左右,,甚至?xí)D(zhuǎn)染失敗。
2,、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素,,內(nèi)毒素對細(xì)胞將產(chǎn)生很大的細(xì)胞毒性,會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80%左 右,,甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen、TIANGEN,、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒),。
3、復(fù)合物的制備過程中是絕不能用其他任何試劑對核酸或轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行稀釋,,只需將核酸和轉(zhuǎn)染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合,,如果進(jìn)行了稀釋會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失。
4,、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次,,室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細(xì)胞培養(yǎng)板。
5,、轉(zhuǎn)染 24 小時后進(jìn)行正常換液,,不能像 Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染 4-6 小時后換液。
6,、原代細(xì)胞,、免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染時,細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基,。
四,、產(chǎn)品說明:
1,、產(chǎn)品名稱
Advanced DNA RNA Transfection Reagent
2、包裝規(guī)格
貨號:AD600025 ,、AD600050,、AD600075、AD600150
規(guī)格:0.25ml,、0.5ml,、0.75ml、1.5ml
3,、儲存條件
常溫運(yùn)輸,,4℃保存,可保存兩年,,拒絕反復(fù)凍融,。
深圳市安培生物科技有限公司是美國 Zeta Life 公司的中國代理商。Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑大量現(xiàn)貨,,均經(jīng)過反復(fù)充分驗(yàn)證,,轉(zhuǎn)染效果好且重復(fù)性佳,提供完整售后服務(wù)和技術(shù)支持,。尊敬的客戶您如在訂購過程中遇到任何問題都可以與我司客戶經(jīng)理聯(lián)系尋求幫助,。
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