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一,、小鼠睪丸間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑簡(jiǎn)介：

隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展,，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能,、調(diào)控基因表達(dá),、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中，其應(yīng)用越來(lái)越廣泛,。

理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高,、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。而Zeta Life多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑采用新型分子材料,，其尺寸大小是傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑體積的1/10;通過(guò)細(xì)胞主動(dòng)吞噬吸收進(jìn)入細(xì)胞,；進(jìn)入后對(duì)細(xì)胞膜無(wú)物理性損傷，不易出現(xiàn)細(xì)胞變形,，保持高的細(xì)胞活力,；不激活細(xì)胞表面或細(xì)胞體內(nèi)marker;可反映真實(shí)的細(xì)胞通路蛋白原始數(shù)據(jù)；可轉(zhuǎn)染免疫細(xì)胞,、懸浮細(xì)胞等,。

二、使用說(shuō)明：

1,、材料準(zhǔn)備

RNA 濃度 20 uM /L

質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水,；②無(wú)內(nèi)毒素 ）

2、操作步驟

提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右,，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。

核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻,，室溫靜 止 10-15 分鐘,。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻,；細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清,。

細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中不用換液,。

分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,，48-96 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選,。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá),。

三,、產(chǎn)品說(shuō)明：

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2,、包裝規(guī)格

貨號(hào)：AD600025 ,、AD600050、AD600075,、AD600150

規(guī)格：0.25ml,、0.5ml、0.75ml、1.5ml

3,、儲(chǔ)存條件

常溫運(yùn)輸,，4℃保存，可保存兩年,，拒絕反復(fù)凍融。

四,、小鼠睪丸間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效果