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一,、人白血病懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品應(yīng)用：

各種細(xì)胞類(lèi)型中最高的轉(zhuǎn)染效率,。

可用于多種真核細(xì)胞系的DNA轉(zhuǎn)染、siRNA轉(zhuǎn)染和共轉(zhuǎn)染,；

可用于各種原代細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染,、siRNA轉(zhuǎn)染；

可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞,、懸浮細(xì)胞,，如:T細(xì)胞、NK細(xì)胞,、人淋巴細(xì)胞,、THP-1等；

可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動(dòng)物細(xì)胞,。

人白血病懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

二,、產(chǎn)品說(shuō)明：

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2,、包裝規(guī)格

貨號(hào)：AD600025 ,、AD600050、AD600075,、AD600150

規(guī)格：0.25ml,、0.5ml、0.75ml、1.5ml

3,、儲(chǔ)存條件

常溫運(yùn)輸,，4℃保存，可保存兩年,，拒絕反復(fù)凍融,。

三、U937細(xì)胞高效率轉(zhuǎn)染條件分享

一,、轉(zhuǎn)染材料準(zhǔn)備

1. 轉(zhuǎn)染試劑用量：10ul

2. DNA/siRNA濃度：電訊

3. 細(xì)胞密度：1*106-1*105

4. 轉(zhuǎn)染用培養(yǎng)板：6孔板

5. 轉(zhuǎn)染試劑：zeta life ,Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑,；貨號(hào)：AD600025

6. 轉(zhuǎn)染時(shí)間：15小時(shí)

7. 細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清：Z7181FBS-500胎牛血清

8. 細(xì)胞凍存液：L0100無(wú)血清細(xì)胞凍存液

注意：本細(xì)胞轉(zhuǎn)染用量條件不適合lipo使用,。

操作過(guò)程：

1.提前1天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在60-80%左右,，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2. 核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照比例關(guān)系直接混合,，用移液器吹打,、混勻，室溫靜止15分鐘,。

3.在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,，并輕輕混勻；細(xì)胞培養(yǎng)基里面可以含有血清,。

4.細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染24小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液,，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中不用換液。

5.分析結(jié)果：質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48-72小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,，48-96小時(shí)檢測(cè)mRNA或蛋白表達(dá),。若進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后24-48小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選,。siRNA轉(zhuǎn)染后9小時(shí)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,，48-72小時(shí)檢測(cè)mRNA或蛋白表達(dá)。