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in vivo Advanced 活體動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑

1. 描述

in vivo Advanced 活體動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑可以通過靜脈注射或體內(nèi)局部組織注射的方式完成轉(zhuǎn)染過程,。此外，轉(zhuǎn)染過程中總注射體積較小,，致密組織可通過顯微注射來完成轉(zhuǎn)染,，且轉(zhuǎn)染復(fù)合物在體內(nèi)循環(huán)時(shí)間較長。DNA,，siRNA 及共轉(zhuǎn)染均可用此款轉(zhuǎn)染試劑來完成轉(zhuǎn)染操作,。

2. 基本條件

1> DNA

濃度: 300 ng/ul - 2 μg/ul;

溶劑: 質(zhì)粒 DNA 需溶于雙蒸水或超純水;

內(nèi)毒素: 去內(nèi)毒素

2> RNA 濃度: 20 μM, 40 μM, 60 μM, 80 μM

3. 活體動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染操作步驟

1> 轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備: 核酸和轉(zhuǎn)染試劑直接按照 1:1 混合,。之后用移液器吹打混合溶液 10-15 次以充分混勻,。將混合溶液于室溫環(huán)境中靜置 10-15 分鐘，轉(zhuǎn)染復(fù)合物即可制備結(jié)束,。在復(fù)合物制備過程中,，離心管的管壁要確保沒有液體殘留。

2> 用注射器或顯微注射針完成靜脈注射或局部組織注射操作,。

3> 注射后 3-5 天,，轉(zhuǎn)染效率可達(dá)到峰值,，靶基因的表達(dá)量可于此時(shí)進(jìn)行檢測。

活體動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染注射用量

4. 注意事項(xiàng)

1> DNA (μg) 或 20 μM siRNA (μl)與轉(zhuǎn)染試劑的比例為 1:1,。

2> 上表中 siRNA 的注射體積是針對 20 μM siRNA 的,。如果 siRNA 的濃度為 40 μM，則注射體積需減半,；如果 siRNA 的濃度為 80 μM,，則注射體積需為表中體積的 1/4；以此類推,。

3> 進(jìn)行局部組織注射實(shí)驗(yàn)時(shí),，轉(zhuǎn)染復(fù)合物的用量為 5-10 μl/cm2。

4> 進(jìn)行共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí),，核酸總用量應(yīng)和上表中用量一致,，各種核酸用量的比例應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行調(diào)整。之后將各種核酸與轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行充分混合,。

5> 在具體實(shí)驗(yàn)操作過程中,，核酸和轉(zhuǎn)染試劑的用量可根據(jù)上表中最大注射用量進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。