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3D基質(zhì)膠干細(xì)胞培養(yǎng)套裝（不含酚紅）產(chǎn)品說明

1、貨號：B-P-00003-2,、B-P-00003-4,、B-P-00003-10

2、規(guī)格：2ml-kit,、4ml-kit ,、10ml-kit

3、儲存條件：干冰運(yùn)輸，-20℃保存,，可保存一年,。

3D基質(zhì)膠干細(xì)胞培養(yǎng)套裝（不含酚紅）產(chǎn)品描述

應(yīng)用于類器官形成分析；適用于任何基于 3D 類器官培養(yǎng)的藥物篩選平臺,。

（100%植物源材料,、氨基酸序列100%人源化）

試劑的制備

A Gel : 將A Gel置于 37 ℃水浴中

至少 10 分鐘直到*解凍。

C 緩沖液(1X)：新鮮稀釋的 10X C緩沖液

使用前用冷的無血清培養(yǎng)基（例如無血清 DMEM）加入 1X C 緩沖液 ,。（做不稀C緩沖區(qū)與PBS）

D 緩沖液(1X)： 使用前用冷的 1x PBS新鮮稀釋 10X D 緩沖液至 1X D 緩沖液,。

3D 類器官培養(yǎng)的制備

所有步驟均在層流中進(jìn)行，并按指示添加每個(gè)組分的體積比,。

1. 將導(dǎo)熱片 放在冰袋上,。該片材可以快速均勻地冷卻培養(yǎng)板。

2. 重懸于1×10 5?10 7個(gè) 細(xì)胞在生長培養(yǎng)基和1毫升混合物凝膠 在1：1成的 比例,。為了例如,，在 500 m L 生長培養(yǎng)基和 500 m L A 凝膠中重懸 1×10 5 個(gè)細(xì)胞。

注意：在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基和培養(yǎng)條件下培養(yǎng)細(xì)胞,。貼壁細(xì)胞應(yīng)在~80% 匯合度下培養(yǎng),。

3. 將培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿放在導(dǎo)熱片/冰袋上。添加20-40米大號細(xì)胞懸浮液從步驟2到每個(gè)孔中混合,?；旌衔飸?yīng)在 5 分鐘后形成凝膠。注意：通過用移液器吸頭輕輕接觸凝膠來測試凝膠的形成,，從凝膠表面收回吸頭時(shí)不應(yīng)拉出凝膠線,。

4. 一旦凝膠形成，加入 1mL 冷的 1X C緩沖液以覆蓋圓頂 15 分鐘,。

5. 孵育 15 分鐘后,，小心地 用培養(yǎng)基替換C緩沖液。第二天更換培養(yǎng)基,。

6. 將細(xì)胞在CO 2 培養(yǎng)箱中37°C培養(yǎng)7 至14 天,，并用顯微鏡觀察球狀體的形成。培養(yǎng)基可以根據(jù)需要每隔一天更換一次

細(xì)胞的正常生長,。

溶解用于類器官收集的 3D 凝膠

1. 小心去除培養(yǎng)基并用 1X PBS清洗凝膠圓頂,。

2. 小心去除 1X PBS,，在凝膠上加入 1 ml 1X  D 緩沖液,，室溫孵育 5 分鐘。

3. 用 1 mL 吸頭輕輕吸取溶液直至凝膠圓頂*溶解,。

4. 將包含球體的溶液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 試管中,。以 1,000 rpm 的速度旋轉(zhuǎn)球體 10 分鐘。在介質(zhì)中重懸球體以用于感興趣的測定。

從球體中分離單個(gè)細(xì)胞

1. 要分離單個(gè)細(xì)胞,，首先使用上述用于球體收集的溶解 3D 凝膠程序分離球體,。

2. 將胰蛋白酶-EDTA 添加到球體中并在 37°C 下孵育溶液。吸取溶液直到球體*解離,。

3. 當(dāng)球體*解離時(shí),，加入 3 倍體積的 1X PBS 并以 1,000 rpm 離心 10 分鐘離心細(xì)胞。去除上清液并收集細(xì)胞以進(jìn)行檢測,。