1） 來源：前列腺,；左鎖骨淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移灶

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣,，輕微貼壁（細(xì)胞貼壁能力較弱,，需使用特殊培養(yǎng)瓶）

3） 含量：>1x10^6 個(gè)/mL

4） 污染：支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

LNCaP clone FGC人前列腺癌細(xì)胞（STR鑒定）運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。 

細(xì)胞接收后的處理：

1） 收到細(xì)胞后,，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們,。

2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行,，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度,。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下,，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照,，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3） 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,。

4） 貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng),，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完-全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）,。

5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完-全培養(yǎng)基）,。

6）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完-全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代 ,。          

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1) 準(zhǔn)備： 1640 ; 優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%; Glutamax1%; Sodium pyruvate1 %;   p/s 1%

2) 培養(yǎng)注意事項(xiàng)：

a. 需使用細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ,。

b. 這株細(xì)胞并不形成一致的單層，而是形成集落,。傳代時(shí)如胰酶消化后細(xì)胞形成聚團(tuán),，可以用滴管反復(fù)吹吸打碎。

c. 該細(xì)胞僅僅輕輕地吸附在基底上,，不形成匯合,，很快使培養(yǎng)基變酸。 生長(zhǎng)很慢,。 傳代后48小時(shí)內(nèi)不應(yīng)擾動(dòng),。

d. 細(xì)胞封包、寄出時(shí),，多數(shù)細(xì)胞從培養(yǎng)瓶底分離,，懸浮在培養(yǎng)基中,。 收到后，在通常培養(yǎng)單層細(xì)胞的條件下培養(yǎng)24到48小時(shí),，以使細(xì)胞再貼壁,。 此后可以換上新鮮培養(yǎng)液。 如果需要,，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)容物可以收集,，300g離心15分鐘，以適量培養(yǎng)液重懸并培養(yǎng)到一個(gè)單獨(dú)的培養(yǎng)瓶中,。

3) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

4) 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注：第一次傳代推薦傳代比例為1:2,，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。

3） 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

下面T25瓶為例,；

1．細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完-全培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,，加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X10^6個(gè)細(xì)胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。