Thp-1細胞高效率轉(zhuǎn)染試劑高效率轉(zhuǎn)染條件分享

一,、轉(zhuǎn)染材料準備

1. 轉(zhuǎn)染試劑用量：10ul

2. siRNA濃度：20um/L

3. 細胞密度：1*106-1*105

4. 轉(zhuǎn)染用培養(yǎng)板：6孔板

5. 轉(zhuǎn)染試劑：Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑；

貨號：AD600025

6. 轉(zhuǎn)染時間：48小時

7. 細胞培養(yǎng)胎牛血清：Z7180FBS-500超低內(nèi)毒素胎牛血清

8. 細胞凍存液：L0100無血清細胞凍存液.

注意：本細胞轉(zhuǎn)染用量條件不適合lipo使用。

二,、操作過程：

1.提前1天接種細胞：細胞匯合度在60-80%左右，再進行轉(zhuǎn)染,。

2. 核酸復合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照比例關(guān)系直接混合,，用移液器吹打、混勻,，室溫靜止15分鐘,。

3.在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復合物：根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復合物，并輕輕混勻,；細胞培養(yǎng)基里面可以含有血清,。

4.細胞換液：轉(zhuǎn)染24小時后對細胞進行正常換液，懸浮細胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液,。

5.分析結(jié)果：質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48-72小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,，48-96小時檢測mRNA或蛋白表達。若進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,，則在轉(zhuǎn)染后24-48小時左右加入適量的藥物進行篩選,。siRNA轉(zhuǎn)染后9小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-72小時檢測mRNA或蛋白表達,。

三,、產(chǎn)品說明：

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2,、Thp-1細胞高效率轉(zhuǎn)染試劑貨號規(guī)格

貨號：AD600025 ,、AD600050、AD600075,、AD600150,、AD600500、AD601000

規(guī)格：0.25ml,、0.5ml,、0.75ml、1.5ml,、5ml,、10ml

3、儲存條件

常溫運輸,，4℃保存,，可保存兩年，拒絕反復凍融,。