ZETA LIFE高效率轉(zhuǎn)染試劑5ml

一,、產(chǎn)品說明：

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2,、包裝規(guī)格

貨號(hào)：AD600500

規(guī)格：5ml

3,、儲(chǔ)存條件

常溫運(yùn)輸，4℃保存,，可保存兩年,，拒絕反復(fù)凍融。

二,、使用說明：

1,、材料準(zhǔn)備

RNA 濃度 20 uM /L

質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素 ）

2,、操作步驟

提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右,，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。

核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合,，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘,。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,，并輕輕混勻；細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清,。

細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液,，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,，48-96 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá),。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選,。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,，48-72 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。

三,、注意事項(xiàng)：

1,、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer,。溶解于 Buffer 的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會(huì)下降 80%左右,，甚至?xí)D(zhuǎn)染失敗,。

2、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素,，內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生很大的細(xì)胞毒性,，會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80%左 右，甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen,、TIANGEN、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒）,。

3,、復(fù)合物的制備過程中是絕對(duì)不能用其他任何試劑對(duì)核酸或轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行稀釋，只需將核酸和轉(zhuǎn)染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合,，如果進(jìn)行了稀釋會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失,。

4、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次,，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細(xì)胞培養(yǎng)板,。

5、轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后進(jìn)行正常換液,，不能像 Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染 4-6 小時(shí)后換液,。

6、原代細(xì)胞,、免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí),，細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基。

轉(zhuǎn)染操作示意圖

不同轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)各成分推薦用量

四,、優(yōu)秀表現(xiàn)

Zeta Life多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑的尺寸大小是傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑體積的1/10;

本轉(zhuǎn)染試劑是通過細(xì)胞內(nèi)?和細(xì)胞主動(dòng)吸收進(jìn)入細(xì)胞,；

本轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)入后對(duì)細(xì)胞膜無物理性損傷，不易出現(xiàn)細(xì)胞變形,，保持高的細(xì)胞活力,；

不激活細(xì)胞表面或細(xì)胞體內(nèi)marker;

可反映真實(shí)的細(xì)胞通路蛋白原始數(shù)據(jù)；

可轉(zhuǎn)染免疫細(xì)胞,、懸浮細(xì)胞等,。

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