細(xì)胞鋪板不均勻會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性造成影響，解決這一問(wèn)題可從實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備,、鋪板操作,、后續(xù)處理等方面著手：

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
確保細(xì)胞狀態(tài)良好：選用處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、活力高且形態(tài)正常的細(xì)胞,。比如培養(yǎng) HeLa 細(xì)胞,，需定期觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)，若細(xì)胞出現(xiàn)皺縮,、空泡等異常,，應(yīng)及時(shí)調(diào)整培養(yǎng)條件或重新復(fù)蘇細(xì)胞，避免使用狀態(tài)不佳的細(xì)胞進(jìn)行鋪板,。
充分重懸細(xì)胞：消化細(xì)胞后,，使用合適的培養(yǎng)基輕柔吹打，次數(shù)控制在 10-20 次,，使全部細(xì)胞團(tuán)塊分散,，形成單細(xì)胞懸液。例如培養(yǎng) 293T 細(xì)胞,，消化后用移液器吸取培養(yǎng)基,，從培養(yǎng)皿底部緩慢吹打,，確保細(xì)胞均勻分散,，防止因細(xì)胞聚集導(dǎo)致鋪板不均。
校準(zhǔn)移液器：定期對(duì)移液器進(jìn)行校準(zhǔn),，保證移液體積準(zhǔn)確,。可通過(guò)稱(chēng)量移液器吸取的去離子水重量,，根據(jù)水在特定溫度下的密度計(jì)算實(shí)際移液體積,，與設(shè)定體積對(duì)比，偏差應(yīng)控制在 ±2% 以?xún)?nèi),。例如吸取 100μl 液體,，實(shí)際重量應(yīng)在 0.098-0.102g 之間。
檢查培養(yǎng)板質(zhì)量：仔細(xì)檢查培養(yǎng)板,，確?？椎灼秸饣瑹o(wú)變形,、劃痕等瑕疵,。新購(gòu)培養(yǎng)板可隨機(jī)抽取幾塊，向各孔加入等量液體,，在顯微鏡下觀(guān)察液面高度和平整度是否一致,。

鋪板操作
采用合適的鋪板方法：
多次移液法：將細(xì)胞懸液按每孔所需體積分多次加入,，每次加入后輕微晃動(dòng)培養(yǎng)板。如每孔需加 200μl 細(xì)胞懸液,，可先加 100μl,，水平輕晃使細(xì)胞初步分布，再補(bǔ)加 100μl,，繼續(xù)輕晃,，增加細(xì)胞分布均勻性。
之" 字形晃動(dòng)法：加完細(xì)胞懸液后,，手持培養(yǎng)板沿 “之" 字形緩慢晃動(dòng),，幅度約 2-3cm，頻率每分鐘 10-15 次,，每個(gè)方向晃動(dòng) 2-3 個(gè)來(lái)回,，促使細(xì)胞均勻分布在孔底。
控制加樣速度：加樣時(shí)移液器吸頭貼近孔壁,，緩慢勻速將細(xì)胞懸液放出,，速度控制在每秒 10-15μl，避免液體沖擊孔底導(dǎo)致細(xì)胞分布不均,。
保持環(huán)境穩(wěn)定：鋪板過(guò)程在溫度（37±1）℃,、相對(duì)濕度 70%-80% 的超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，減少溫度,、濕度變化對(duì)細(xì)胞懸液的影響,。

后續(xù)處理
避免過(guò)度振動(dòng)：鋪板后將培養(yǎng)板平穩(wěn)放入培養(yǎng)箱，避免碰撞,、振動(dòng),，防止已初步分布的細(xì)胞重新聚集。
進(jìn)行預(yù)平衡：將鋪好細(xì)胞的培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)放置 15-30 分鐘,，使細(xì)胞初步貼壁,，再進(jìn)行后續(xù)操作，有助于細(xì)胞均勻分布,。

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