技術(shù)背景

細胞內(nèi)的核酸包括DNA與RNA兩種分子,，均與蛋白質(zhì)結(jié)合成核蛋白 (nucleoprotein),。其中真核生物的DNA又有染色體DNA與細胞器DNA之分,。前者位于細胞核內(nèi),，約占95%,，為雙鏈線性分子,；后者存在于線粒體或葉綠體等細胞器內(nèi),，約占5%，為雙鏈環(huán)狀分子,。除此之外,，在原核生物中還有雙鏈環(huán)狀的質(zhì)粒DNA；在非細胞型的病毒顆粒內(nèi)，DNA 的存在形式多種多樣,，有雙鏈環(huán)狀,，單鏈環(huán)狀，雙鏈線狀和單鏈線狀之分,。RNA是以DNA的一條鏈為模板,，通過堿基互補配對原則，轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈,，主要功能是實現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達,，是遺傳信息向表型轉(zhuǎn)化過程中的橋梁。在此過程中,，tRNA攜帶與三聯(lián)體密碼子對應的氨基酸殘基,，與正在進行翻譯的mRNA結(jié)合，而后rRNA將各個氨基酸殘基通過肽鍵連接成肽鏈進而構(gòu)成蛋白質(zhì)分子,。相對來講,，RNA分子比DNA分子要小很多，其種類,，大小結(jié)構(gòu)和功能均更加多樣化,。

提取純化產(chǎn)品冊

大多數(shù)的分子生物學實驗都是從核酸的分離純化開始，進而展開下游的實驗,，如 RT-PCR,、qPCR 及酶促反應等等。核酸的純度,、產(chǎn)量,、質(zhì)量都會直接影響下游實驗。因此,，有效地去除各種雜質(zhì)殘留和污染,，并保證核酸的完整性，是完成下游實驗最基本的條件,，這也說明了核酸的分離純化在分子生物學中的重要地位,。核酸分離與純化的方法很多,，應根據(jù)具體生物材料的性質(zhì)與起始量,，以及分離核酸的性質(zhì)與用途而采取不同的方案。

目前,，常見的核酸抽提純化方法主要三類：

溶液型的抽提方法：（酚CHCL3抽提,、鹽析等）

柱式抽提方法：（離子交換、硅膠柱等）

磁珠純化方法

選購指南

RNA Keeper Tissue Stabilizer

用于保護新鮮組織RNA完整性的保存劑(R501)    

產(chǎn)品概述    

RNA Keeper Tissue Stabilizer是一種無毒的溶液,，可迅速滲入組織內(nèi)部,，滅活內(nèi)源RNase，立即穩(wěn)定并保護RNA的完整性,。新鮮的組織樣本無需液氮速凍,，只要浸入RNA Keeper Tissue Stabilizer中,，即可在37°C保存1天，室溫保存1周,，4°C保存4周或在-20°C/-80°C長期保存,，且反復凍融不會顯著影響RNA的完整性。RNA Keeper Tissue Stabilizer中存放的樣本可直接使用 RNA isolater總RNA提取試劑(Vazyme #R401),、(Vazyme #R701)或離心柱法 (Vazyme #RC101)提取RNA,。RNA Keeper Tissue Stabilizer可用于腦、心臟,、肝臟,、胰臟、腎臟,、脾臟,、肌肉等軟性組織的保存，不適用于表面有蠟質(zhì)或硬殼類的生物體樣本保存,。

性能展示

將小鼠肝臟組織(1)和脾臟組織(2)保存在RNA Keeper中,，分別在37℃放置1天，室溫放置1周,，4℃放置4周后,，用RNA isolater (Vazyme #R401)提取總RNA。電泳結(jié)果表明,，28S,、18S、5S條帶均清晰可見,，說明RNA具有很好的RNA Keeper Tissue Stasilizer可有效保證樣本中RNA不被降解且樣本可在RNA Keeper Tissue Stasilizer中穩(wěn)定儲存,。
                               

操作流程概要

適用范圍

動物組織 / 細胞

組分

操作流程
1.樣品處理

①動物組織：把動物組織切成0.5 cm左右見方的組織塊，加入5倍體積的RNA Keeper,。

②培養(yǎng)細胞：按照標準實驗操作方法收集細胞,，用PBS 清洗后加入5-10倍體積的RNAKeeper。

③酵母：收集大約10⁸個細胞(12,000 g,，2 min),，棄上清。加入 0.5~1 ml的RNAKeeper,。長期保存時應將酵母細胞置于RNA Keeper中,，室溫或4℃放置1小時，

然后離心收集細胞(12,000 g,，5 min),，棄上清，再置于-80℃保存。

△只適用于較柔軟的植物組織,，如嫩葉,、嫩莖等；如果植物組織表面有蠟,，則RNA Keeper不能充分滲入,，嚴重影響RNA保護效果

2.樣品保存

樣品存儲于RNA Keeper中，一般可在4℃穩(wěn)定保存4周,。若要在-20℃/-80℃長期保存,，需要將樣品浸入RNA Keeper后，4℃放置過夜,，使溶液充分滲入到組織中后,，再轉(zhuǎn)移至-20℃/-80℃。

3.RNA提取

去除RNA Keeper：組織塊可以直接用滅菌鑷子從RNA Keeper中取出,，擠掉多余的RNA Keeper,，并用吸水紙輕輕吸掉表面液體，立即置于裂解液中勻漿,。細胞應先離心(>10,000 g,，5 min)，收集細胞沉淀（由于RNA Keeper 密度較大,，此時需要使用大于普通介質(zhì)的離心力）,。并用PBS洗滌一次。RNA提?。菏褂酶鞣N常見的RNA抽提試劑盒提取 RNA,。

RNA Keeper Tissue Stabilizer

用于保護新鮮組織RNA完整性的保存劑(R502）

RNA Keeper-ICE是一種新型試劑，能使冰凍組織解凍并轉(zhuǎn)變到易于勻漿方法處理的狀態(tài),，從而提取高質(zhì)量的RNA,。當浸沒在RNA Keeper-ICE中的組織從堅硬的冰凍狀態(tài)變?nèi)彳浀倪^程中，該溶液可滲入組織,，使RNase失活,。組織一旦經(jīng)RNA Keeper-ICE溶液處理，就能在室溫下操作而不用擔心RNA降解,。樣品可在常溫下稱重,，切割，或者進行多種實驗而不影響RNA質(zhì)量,。

性能展示

小鼠肝臟冰凍組織經(jīng)過RNA Keeper-ICE解凍后研磨,，提取的RNA進行瓊脂糖凝膠電泳。電泳結(jié)果表明,，28S，18S，5S均清晰可見,，說明RNA具有良好的完整性,。RNA Keeper-ICE可有效保證RNA完整度的同時對冰凍組織進行解凍。

操作流程概要

適用范圍

動物組織 / 細胞

組分

操作流程

1.試劑預處理

將RNA Keeper-ICE于-70℃或-80℃預冷,。

2.冰凍樣品處理

①動物組織：按100mg組織比不小于1 ml RNA Keeper-ICE的比例,，將冰凍組織浸沒于預冷的RNA Keeper-ICE中。

△組織塊的厚度應不超過0.5cm, 否則會影響RNA Keeper-ICE的滲透效率,，導致RNA穩(wěn)定效果變差,。

②培養(yǎng)細胞、白細胞：按照標準實驗操作方法收集細胞,，用PBS清洗后加入至少10倍體積RNA Keeper-ICE,，蓋緊管蓋，上下顛倒數(shù)次,。此時沉淀是否被全部懸浮對實驗無影響,。

-20℃存放至少16h后，組織即可進行勻漿,；若不立即勻漿,，組織可繼續(xù)于-20℃穩(wěn)定存放6個月。

-20℃存放過程中,，組織可從RNA Keeper-ICE中取出進行室溫切割,、稱重等操作，之后繼續(xù)浸潤于RNA Keeper-ICE中-20℃保存,。

△組織在室溫暴露時間不可超過30 min,。

3. RNA 提取

將組織取出，用滅菌鑷輕輕擠掉多余的 RNA Keeper-ICE溶液,，并用吸水紙輕輕吸掉表面液體,，置于裂解液中立刻勻漿。

△如果是細胞樣品,，10,000g,，4℃ 離心 1 min，棄上清,，加入裂解液,。

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