技術(shù)背景

細(xì)胞內(nèi)的核酸包括DNA與RNA兩種分子,，均與蛋白質(zhì)結(jié)合成核蛋白 (nucleoprotein),。其中真核生物的DNA又有染色體DNA與細(xì)胞器DNA之分。前者位于細(xì)胞核內(nèi),，約占95%,，為雙鏈線(xiàn)性分子；后者存在于線(xiàn)粒體或葉綠體等細(xì)胞器內(nèi),，約占5%,，為雙鏈環(huán)狀分子。除此之外,，在原核生物中還有雙鏈環(huán)狀的質(zhì)粒DNA,；在非細(xì)胞型的病毒顆粒內(nèi)，DNA 的存在形式多種多樣,，有雙鏈環(huán)狀,，單鏈環(huán)狀，雙鏈線(xiàn)狀和單鏈線(xiàn)狀之分,。RNA是以DNA的一條鏈為模板,，通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈,，主要功能是實(shí)現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá),，是遺傳信息向表型轉(zhuǎn)化過(guò)程中的橋梁。在此過(guò)程中,，tRNA攜帶與三聯(lián)體密碼子對(duì)應(yīng)的氨基酸殘基,，與正在進(jìn)行翻譯的mRNA結(jié)合，而后rRNA將各個(gè)氨基酸殘基通過(guò)肽鍵連接成肽鏈進(jìn)而構(gòu)成蛋白質(zhì)分子,。相對(duì)來(lái)講,，RNA分子比DNA分子要小很多，其種類(lèi),，大小結(jié)構(gòu)和功能均更加多樣化,。

提取純化產(chǎn)品冊(cè)

大多數(shù)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)都是從核酸的分離純化開(kāi)始，進(jìn)而展開(kāi)下游的實(shí)驗(yàn),，如 RT-PCR,、qPCR 及酶促反應(yīng)等等。核酸的純度,、產(chǎn)量,、質(zhì)量都會(huì)直接影響下游實(shí)驗(yàn)。因此，有效地去除各種雜質(zhì)殘留和污染,，并保證核酸的完整性，是完成下游實(shí)驗(yàn)最基本的條件,，這也說(shuō)明了核酸的分離純化在分子生物學(xué)中的重要地位,。核酸分離與純化的方法很多，應(yīng)根據(jù)具體生物材料的性質(zhì)與起始量,，以及分離核酸的性質(zhì)與用途而采取不同的方案,。

目前，常見(jiàn)的核酸抽提純化方法主要三類(lèi)：

溶液型的抽提方法：（酚CHCL3抽提,、鹽析等）

柱式抽提方法：（離子交換,、硅膠柱等）

磁珠純化方法

選購(gòu)指南

RNA Keeper Tissue Stabilizer

用于保護(hù)新鮮組織RNA完整性的保存劑(R501)    

產(chǎn)品概述    

RNA Keeper Tissue Stabilizer是一種無(wú)毒的溶液，可迅速滲入組織內(nèi)部,，滅活內(nèi)源RNase,，立即穩(wěn)定并保護(hù)RNA的完整性。新鮮的組織樣本無(wú)需液氮速凍,，只要浸入RNA Keeper Tissue Stabilizer中,，即可在37°C保存1天，室溫保存1周,，4°C保存4周或在-20°C/-80°C長(zhǎng)期保存,，且反復(fù)凍融不會(huì)顯著影響RNA的完整性。RNA Keeper Tissue Stabilizer中存放的樣本可直接使用 RNA isolater總RNA提取試劑(Vazyme #R401),、(Vazyme #R701)或離心柱法 (Vazyme #RC101)提取RNA,。RNA Keeper Tissue Stabilizer可用于腦、心臟,、肝臟,、胰臟、腎臟,、脾臟,、肌肉等軟性組織的保存，不適用于表面有蠟質(zhì)或硬殼類(lèi)的生物體樣本保存,。

性能展示

將小鼠肝臟組織(1)和脾臟組織(2)保存在RNA Keeper中,，分別在37℃放置1天，室溫放置1周,，4℃放置4周后,，用RNA isolater (Vazyme #R401)提取總RNA。電泳結(jié)果表明,，28S,、18S、5S條帶均清晰可見(jiàn)，說(shuō)明RNA具有很好的RNA Keeper Tissue Stasilizer可有效保證樣本中RNA不被降解且樣本可在RNA Keeper Tissue Stasilizer中穩(wěn)定儲(chǔ)存,。
                               

操作流程概要

適用范圍

動(dòng)物組織 / 細(xì)胞

組分

操作流程
1.樣品處理

①動(dòng)物組織：把動(dòng)物組織切成0.5 cm左右見(jiàn)方的組織塊,，加入5倍體積的RNA Keeper。

②培養(yǎng)細(xì)胞：按照標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)操作方法收集細(xì)胞,，用PBS 清洗后加入5-10倍體積的RNAKeeper,。

③酵母：收集大約10⁸個(gè)細(xì)胞(12,000 g，2 min),，棄上清,。加入 0.5~1 ml的RNAKeeper。長(zhǎng)期保存時(shí)應(yīng)將酵母細(xì)胞置于RNA Keeper中,，室溫或4℃放置1小時(shí),，

然后離心收集細(xì)胞(12,000 g，5 min),，棄上清,，再置于-80℃保存。

△只適用于較柔軟的植物組織,，如嫩葉,、嫩莖等；如果植物組織表面有蠟,，則RNA Keeper不能充分滲入,，嚴(yán)重影響RNA保護(hù)效果

2.樣品保存

樣品存儲(chǔ)于RNA Keeper中，一般可在4℃穩(wěn)定保存4周,。若要在-20℃/-80℃長(zhǎng)期保存,，需要將樣品浸入RNA Keeper后，4℃放置過(guò)夜,，使溶液充分滲入到組織中后,，再轉(zhuǎn)移至-20℃/-80℃。

3.RNA提取

去除RNA Keeper：組織塊可以直接用滅菌鑷子從RNA Keeper中取出,，擠掉多余的RNA Keeper,，并用吸水紙輕輕吸掉表面液體，立即置于裂解液中勻漿,。細(xì)胞應(yīng)先離心(>10,000 g,，5 min)，收集細(xì)胞沉淀（由于RNA Keeper 密度較大,，此時(shí)需要使用大于普通介質(zhì)的離心力）,。并用PBS洗滌一次。RNA提?。菏褂酶鞣N常見(jiàn)的RNA抽提試劑盒提取 RNA,。

RNA Keeper Tissue Stabilizer

用于保護(hù)新鮮組織RNA完整性的保存劑(R502）

RNA Keeper-ICE是一種新型試劑,，能使冰凍組織解凍并轉(zhuǎn)變到易于勻漿方法處理的狀態(tài)，從而提取高質(zhì)量的RNA,。當(dāng)浸沒(méi)在RNA Keeper-ICE中的組織從堅(jiān)硬的冰凍狀態(tài)變?nèi)彳浀倪^(guò)程中,，該溶液可滲入組織，使RNase失活,。組織一旦經(jīng)RNA Keeper-ICE溶液處理,，就能在室溫下操作而不用擔(dān)心RNA降解。樣品可在常溫下稱(chēng)重,，切割，或者進(jìn)行多種實(shí)驗(yàn)而不影響RNA質(zhì)量,。

性能展示

小鼠肝臟冰凍組織經(jīng)過(guò)RNA Keeper-ICE解凍后研磨,，提取的RNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。電泳結(jié)果表明,，28S,，18S，5S均清晰可見(jiàn),，說(shuō)明RNA具有良好的完整性,。RNA Keeper-ICE可有效保證RNA完整度的同時(shí)對(duì)冰凍組織進(jìn)行解凍。

操作流程概要

適用范圍

動(dòng)物組織 / 細(xì)胞

組分

操作流程

1.試劑預(yù)處理

將RNA Keeper-ICE于-70℃或-80℃預(yù)冷,。

2.冰凍樣品處理

①動(dòng)物組織：按100mg組織比不小于1 ml RNA Keeper-ICE的比例,，將冰凍組織浸沒(méi)于預(yù)冷的RNA Keeper-ICE中。

△組織塊的厚度應(yīng)不超過(guò)0.5cm, 否則會(huì)影響RNA Keeper-ICE的滲透效率,，導(dǎo)致RNA穩(wěn)定效果變差,。

②培養(yǎng)細(xì)胞、白細(xì)胞：按照標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)操作方法收集細(xì)胞,，用PBS清洗后加入至少10倍體積RNA Keeper-ICE,，蓋緊管蓋，上下顛倒數(shù)次,。此時(shí)沉淀是否被全部懸浮對(duì)實(shí)驗(yàn)無(wú)影響,。

-20℃存放至少16h后，組織即可進(jìn)行勻漿,；若不立即勻漿,，組織可繼續(xù)于-20℃穩(wěn)定存放6個(gè)月。

-20℃存放過(guò)程中,，組織可從RNA Keeper-ICE中取出進(jìn)行室溫切割,、稱(chēng)重等操作，之后繼續(xù)浸潤(rùn)于RNA Keeper-ICE中-20℃保存,。

△組織在室溫暴露時(shí)間不可超過(guò)30 min,。

3. RNA 提取

將組織取出,，用滅菌鑷輕輕擠掉多余的 RNA Keeper-ICE溶液，并用吸水紙輕輕吸掉表面液體,，置于裂解液中立刻勻漿,。

△如果是細(xì)胞樣品，10,000g,，4℃ 離心 1 min,，棄上清，加入裂解液,。

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