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當(dāng)前位置:深圳市安培生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>共表達(dá)抗原的工作
抗原間的相互關(guān)系分為三種,,分別是互斥關(guān)系,、子代與親代的關(guān)系和共表達(dá)關(guān)系。
互斥關(guān)系是指兩種抗原不會同時表達(dá)在一中細(xì)胞上,,即表達(dá)A不表達(dá)B,,表達(dá)B不表達(dá)A。配色時,,互斥的抗原是允許熒光溢漏的,。
子代與親代關(guān)系是指抗原之間是上下級關(guān)系,即下級抗原是在上級抗原的基礎(chǔ)上進行分析的,。
共表達(dá)關(guān)系是指兩種抗原同時表達(dá)在一種細(xì)胞上,。配色時,共表達(dá)抗原要搭配熒光干擾較小的熒光素,,盡量避免熒光溢漏,。
什么樣的抗原屬于共表達(dá)抗原呢,?以Treg細(xì)胞為例,Treg細(xì)胞同時表達(dá)CD25和Foxp3,,那么CD25和Foxp3就屬于共表達(dá)關(guān)系,。在這種情況下,CD25和Foxp3需要搭配相互之間沒有溢漏的熒光素,,比如搭配APC和PE,,因為這兩個熒光素是幾乎沒有干擾的,因此可獲得預(yù)期的數(shù)據(jù)結(jié)果,。
在多色流式實驗中,,如果兩個共表達(dá)Marker使用的熒光染料之間干擾較嚴(yán)重,則會對圈門造成干擾,,影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,。雖然我們也能通過調(diào)節(jié)補償來減少光譜重疊的影響,但對被干擾通道熒光靈敏度降低的影響是無法通過后續(xù)的結(jié)果分析來消除的,。
圖2. 熒光干擾的影響
如果共表達(dá)抗原之間有嚴(yán)重?zé)晒飧蓴_會怎么樣呢,?那結(jié)果就可能出現(xiàn)如上圖右所示的情況,雖然進行了補償調(diào)節(jié),,但得到的目的細(xì)胞的比例跟實際有差別,。
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