背景介紹

Caco2細胞是常見的結(jié)腸腺癌細胞，正常情況下,，Caco2細胞在培養(yǎng)的過程中貼壁生長,，其形狀多為多邊形或梭形，增殖速度較快,，其鏡下形態(tài)如下圖所示,，密度已大于90%。可以進行傳代,。

培養(yǎng)方法：

1.培養(yǎng)基配置：DMEM高糖培養(yǎng)基 + 10%胎牛血清 + 1%青霉素鏈霉素雙抗 + 1%谷氨酰胺,。

2.其余需要準備的試劑耗材包括：無菌PBS、腺酶,、無菌槍頭,、細胞培養(yǎng)皿、15ml離心管,、離心機,、生物安全柜、水浴鍋,、75%酒精,。

3.培養(yǎng)條件：37°C、5%CO2的細胞培養(yǎng)箱,；

4.細胞復(fù)蘇：提前將水浴鍋溫度調(diào)至37°C,，從液氮罐中拿出細胞，迅速放在37°C水浴鍋中輕輕晃動,，使細胞快速融化,，融化后用移液器輕輕混勻，將其轉(zhuǎn)移到15ml離心管內(nèi),，加入1-2ml培養(yǎng)基,，室溫800rpm離心5min，去上清后加入1ml培養(yǎng)基重懸10次左右,，將其全部加入6cm細胞培養(yǎng)皿內(nèi)（提前加入4-6ml培養(yǎng)基）,，十字混勻后放入細胞培養(yǎng)箱中，24h觀察細胞密度進行后續(xù)操作,。

5.細胞傳代：當細胞密度≥90%時,，進行細胞傳代，吸掉原有培養(yǎng)基,，沿培養(yǎng)皿邊緣加入1ml PBS清洗,，吸掉PBS后加入750μl含EDTA的胰酶消化，消化時間2min左右,，消化完成后加入1.5ml培養(yǎng)基中止消化,，用移液槍吹打，保證細胞全部被吹下,，將混合液全部轉(zhuǎn)移到離心管中,，室溫800rpm離心5min，去上清后加入1ml培養(yǎng)基充分重懸,，取333μl加入有4ml培養(yǎng)基的6cm細胞培養(yǎng)皿中,，十字混勻后放入細胞培養(yǎng)箱內(nèi),，1-3天后根據(jù)細胞密度換液或傳代。

6.細胞凍存：前述收集細胞沉淀,，加入1ml凍存液（培養(yǎng)基：FBS：DMSO=7：2：1）充分重懸,，將混合液移入凍存管內(nèi)，標記好基本信息,，將凍存管入凍存盒后放入-80℃冰箱,，24h后可將凍存管放入-80℃冰箱細胞盒內(nèi)。

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