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WB蛋白樣本煮多久合適,?

時(shí)間:2024/4/28閱讀:1026
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WB蛋白樣本煮制時(shí)間的那些事兒

大家在進(jìn)行 WB 實(shí)驗(yàn)時(shí),可能會(huì)有這樣的疑問:蛋白樣本到底煮多久合適呢,???
通常來說,,WB 蛋白樣本的煮制時(shí)間在 3-5 分鐘左右。不過,,這只是一個(gè)大致的范圍哦,,具體時(shí)間還得根據(jù)實(shí)際情況來調(diào)整。
通常6孔板細(xì)胞80%以上密度,,需200ul,,其他按平板面積比類推。

在煮制蛋白樣本時(shí),,有幾點(diǎn)需要注意哦:

1.煮制時(shí)間不宜過長,,不然可能會(huì)導(dǎo)致蛋白變性,影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果;

2.煮制溫度控制在95-100°C之間為宜;

3.煮制過程中要記得混勻樣本,,確保樣本受熱均勻,。

當(dāng)樣品核酸、蛋白濃度過高時(shí),,煮樣后會(huì)發(fā)現(xiàn)槍頭吸不上來,,非常粘,、一砣一砣的,,很容易堵住槍頭
這時(shí)候建議兩種處理方法:
1.再煮5min,。常規(guī)煮樣時(shí)間3-5min,,樣品過濃時(shí)就煮10min;
2.如果10min煮樣后,,仍然吸不起來,,才適當(dāng)增加buffer,,繼續(xù)煮;也可以對(duì)樣品進(jìn)行超聲,。煮樣時(shí)間若過長,,蛋白會(huì)凝固,此時(shí)已失去繼續(xù)WB的意義,,請(qǐng)丟棄(判斷標(biāo)準(zhǔn):出現(xiàn)明顯的蛋白沉淀和水分層),。

如果你對(duì)煮制時(shí)間拿不準(zhǔn),不妨先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),,找到最恰當(dāng)的煮制時(shí)間吧,!


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