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WB蛋白樣本煮多久合適,?

時間:2024/4/28閱讀:742
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WB蛋白樣本煮制時間的那些事兒

大家在進(jìn)行 WB 實(shí)驗(yàn)時,,可能會有這樣的疑問:蛋白樣本到底煮多久合適呢,???
通常來說,,WB 蛋白樣本的煮制時間在 3-5 分鐘左右,。不過,這只是一個大致的范圍哦,,具體時間還得根據(jù)實(shí)際情況來調(diào)整,。
通常6孔板細(xì)胞80%以上密度,需200ul,,其他按平板面積比類推,。

在煮制蛋白樣本時,有幾點(diǎn)需要注意哦:

1.煮制時間不宜過長,,不然可能會導(dǎo)致蛋白變性,,影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果;

2.煮制溫度控制在95-100°C之間為宜;

3.煮制過程中要記得混勻樣本,確保樣本受熱均勻,。

當(dāng)樣品核酸,、蛋白濃度過高時,煮樣后會發(fā)現(xiàn)槍頭吸不上來,,非常粘、一砣一砣的,,很容易堵住槍頭,。
這時候建議兩種處理方法:
1.再煮5min。常規(guī)煮樣時間3-5min,,樣品過濃時就煮10min,;
2.如果10min煮樣后,,仍然吸不起來,才適當(dāng)增加buffer,,繼續(xù)煮,;也可以對樣品進(jìn)行超聲。煮樣時間若過長,,蛋白會凝固,,此時已失去繼續(xù)WB的意義,請丟棄(判斷標(biāo)準(zhǔn):出現(xiàn)明顯的蛋白沉淀和水分層),。

如果你對煮制時間拿不準(zhǔn),,不妨先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),找到最恰當(dāng)的煮制時間吧,!


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