一,、TRIzol法提取RNA的原理

Trizol是一種廣泛適用于多種樣品總RNA提取的試劑,，例如人,、動物,、植物和細(xì)菌、血液等,。一般提取的總RNA沒有DNA和蛋白質(zhì)污染,，常用于RT-qPCR、mRNA純化等實驗,。

廣譜型Trizol含有異硫氰酸胍/酚,，具有裂解能力，可在短時間內(nèi)裂解細(xì)胞和組織樣本并有效抑制RNase酶活性從而保證RNA的完整性。其原理是Trizol中異硫氰酸胍,、苯酚等不可逆地使蛋白質(zhì)和RNase變性,。隨后進(jìn)行離心。在酸性條件下,，總RNA保留在上層水相中,，而大部分DNA和蛋白質(zhì)保留在中間相或下層有機相中。然后通過用異丙醇沉淀回收總RNA,。

在這個過程中,，可利用吡咯碳酸二乙酯(DEPC)可滅活RNase酶,，75%的酒精洗滌RNA沉淀,，去除蛋白質(zhì)，相關(guān)有機物的污染,；最后用無核酶水溶解白色沉淀得到所需RNA,。值得注意的是TRizol有毒，需在通風(fēng)櫥內(nèi)操作,，做好自我防護?。?/p>

圖2. 6cm培養(yǎng)皿

（1）對于細(xì)胞鋪板：一般情況下我會收集10cm的皿4個或者5個T25培養(yǎng)瓶,，一般情況下細(xì)胞生長較好可能會有3000-4000萬的細(xì)胞，多的有5000萬（懸浮細(xì)胞）,。以懸浮細(xì)胞為例,，漿細(xì)胞收集至15ml離心管后，離心去上清,，再用1-2ml新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，通常會用1ml重懸。根據(jù)傳統(tǒng)的細(xì)胞計數(shù)板估計細(xì)胞數(shù)目：

7,、通常為了節(jié)約試劑，減少用量,，0.5ml的TRIZOL足夠RNA的提取,。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊,，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊,。

安培生物致力成為推動生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè),?？偛吭O(shè)在廣東，服務(wù)面向全國,。安培生物集進(jìn)口試劑,、實驗室耗材銷售,、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù),。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué),、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué),、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu),、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品,、技術(shù)支持與服務(wù)。

可以在第一時間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù),。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術(shù)支持,，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁,。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商,，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持,，隨時為客戶提供服務(wù),。