2. 將兔子敢在固定架上,，用一只手抓住兔的頸背部毛皮,，另一只手托住兔的后腿及臀部，將兔束緊固定以使后肢不能伸張,，用70%乙醇對(duì)所要注射的區(qū)域進(jìn)行清潔消毒，在后肢大腿肌肉內(nèi)進(jìn)針約1 cm 深,，毎條大腿肌肉內(nèi)最多注射0.5 ml 乳化液,。

3. 四周后,，用1 mg 的混溶干弗氏不完-全佐劑的抗原乳化液（1：1）對(duì)兔進(jìn)行肌肉內(nèi)加強(qiáng)免疫注射,，操作步驟同1和2，初次加強(qiáng)免疫后2周再次進(jìn)行加強(qiáng)免疫注射,。

4. 第二次加強(qiáng)免疫注射10天后,，從兔的耳緣靜脈處放血。

（1）先將兔固定在固定架上（固定緊）,，使其耳朵伸出,，用70%乙醇洗潔消毒一側(cè)耳朵。

（2）將兔耳置于熱燈之下,，用手指輕輕地拍打兔耳,；1~2 min 內(nèi)兔耳上的血管即會(huì)充分地充盈,。

（3）用一消毒過(guò)的解剖刀的鋒尖在兔耳緣靜脈上迅速劃一長(zhǎng)約0.5 cm 的小口，收集兔血于50 ml 的塑料離心管中,，直至傷口不再流血為止,。

（4）使兔血順管壁下落,，以避免發(fā)生溶血。

5. 將兔耳擦拭干凈,，涂以70%乙醇,，在耳朵傷口上涂一層凡士林，以減輕由乙醇產(chǎn)生的皮膚刺激感,。

6. 將兔血在室溫下靜置數(shù)小時(shí)后置4 ℃過(guò)夜,，用一木質(zhì)的撥棒將血凝塊輕輕地挑松并使之由離心管的側(cè)壁脫落，將血洧移到合適的離心管中,，5 000 g 離心10 min,，去除殘留的紅細(xì)胞及其他碎片。

7. 每?jī)尚瞧谶M(jìn)行進(jìn)一步的加強(qiáng)免疫,。每次加強(qiáng)免疫后10天,，可采集一次兔血，兔的兩只耳朵可輪流交替進(jìn)行采血,。

8. 采用ELISA法或RIA法對(duì)血清中的特異性抗體進(jìn)行滴度測(cè)定,。如果需要的話。

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兔多克隆抗血清的制備

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