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深圳市安培生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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血清系列
細(xì)胞轉(zhuǎn)染
支原體清除
細(xì)胞凍存
實(shí)驗(yàn)耗材
分子試劑
細(xì)胞增殖與凋亡
Biozellen系列
培養(yǎng)基
ELISA試劑盒
TOYOBO（東洋紡）
ZYMO RESEARCH
Greiner（格瑞納）
IKA（艾卡）
化學(xué)發(fā)光底物（ECL）
PROSPEC系列
Epigentek系列
微生物檢測(cè)
細(xì)胞生物學(xué)
Corning康寧
解離試劑
細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材
原代細(xì)胞
植物檢測(cè)系列試劑盒
SERANA
BSA
細(xì)胞系
生化試劑盒
環(huán)境檢測(cè)系列試劑盒（AKEN）
類器官培養(yǎng)
緩沖器和解決方案
生物三凝膠基質(zhì)
細(xì)胞因子分子
生物樣本庫(kù)
蛋白研究系列

免疫組織化染色

時(shí)間：2023/4/10閱讀：936
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材料與儀器

新鮮組織
二甲苯 酒精 H2O2 抗原修復(fù)液 枸櫞酸鈉緩沖液 石蠟 福爾馬林 PBS DAB 蘇木素 樹(shù)膠 丙酮 打孔液 檸檬酸鈉 APES
恒溫?fù)u床 高壓鍋 塑料切片架 耐溫玻璃容器 -80℃冰箱 恒冷冰凍切片機(jī) 載玻片

步驟

一．石蠟切片免疫組化染色實(shí)驗(yàn)步驟：
1．石蠟切片脫蠟至水：（石蠟切片染色前應(yīng)置60℃ 1 小時(shí)）。
（1）二甲苯I,、II,各10 分鐘。
（2）梯度酒精：100%,，2 分鐘® 95%,，2 分鐘® 80%，2 分鐘® 70%2 分鐘,。
（3）蒸餾水洗：5 分鐘,，2 次（置于搖床）。
2．過(guò)氧化氫封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：3%H2O2,，室溫10 分鐘（避光）。
3．蒸餾水洗：5 分鐘,，2 次（置于搖床）,。
4．抗原修復(fù)：
根據(jù)待檢測(cè)的抗原，選擇適當(dāng)?shù)姆椒ā?/div>
附：抗原修復(fù)液（10mM pH 6.0 枸櫞酸鈉緩沖液）的配制
（1）儲(chǔ)備液的配制：
A 液：枸櫞酸三鈉-2H2O 29.41g + 蒸餾水1000ml
B 液：枸櫞酸21g + 蒸餾水1000ml
（2）工作液的配制：A 液82ml + B 液18ml + 蒸餾水900ml
抗原修復(fù)的方法：
（1）高壓鍋處理技術(shù)：枸櫞酸鈉緩沖液（10mM,，PH6.0）,淹沒(méi)切片,蓋上鍋蓋,，高壓鍋內(nèi)煮沸,上汽3 分鐘后緩慢冷卻（可用自來(lái)水在高壓鍋外沖，以助冷卻）,。
（2）微波處理技術(shù):用塑料切片架,置于塑料或耐溫玻璃容器內(nèi),，枸櫞酸鈉緩沖液淹沒(méi)切片，選擇中高或高檔,5 分鐘;取出并補(bǔ)充已預(yù)熱的枸櫞酸鈉緩沖液,；再選擇中高或高檔,5 分鐘（. 最佳溫度為92～95℃）
（3）酶消化處理：此略,。
抗原修復(fù)的注意事項(xiàng)：
（1）組織不能干。
（2）選擇抗原修復(fù)方法要因抗體而異,。
（3）該方法主要用于10%福爾馬林固定,、石蠟包埋組織。
（4）抗原修復(fù)后至DAB 顯色的過(guò)程中,，均需用PBS 緩沖液,。
5．PBS：5 分鐘，2 次（置于搖床）,。

6．正常血清封閉：從染片缸中取出切片,，擦凈切片背面水分及切片正面組織周圍的水分（保持組織呈濕潤(rùn)狀態(tài)）,滴加正常山羊或兔血清（與第二抗體同源動(dòng)物血清）處理，37℃,，15 分鐘,。


深圳安培生物科技有限公司,，是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、壹流的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè),?？偛吭O(shè)在廣東，服務(wù)面向全國(guó),。安培生物集進(jìn)口試劑,、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開(kāi)發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù),。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué),、免疫學(xué),、信號(hào)傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu),、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù),。


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