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混合淋巴細(xì)胞增殖

時間：2023/1/11閱讀：1126
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簡介

混合淋巴細(xì)胞增殖實驗也稱混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（MLC）或稱混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR）,，常用于器-官-移-植前的組織配型，以測定受體和供體主要組織相容性抗原（HLA 抗原）相容的程度。

材料與儀器

器材：細(xì)胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、吸管等,、CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱、超凈臺。
試劑：
① 10％FCS-RPMI 1640 培養(yǎng)基 ;
② 細(xì)胞 DCs 細(xì)胞,、反應(yīng)細(xì)胞,、外周血單個核細(xì)胞。
③ 3 H-TdR 工作液


步驟

混合淋巴細(xì)胞增殖實驗的基本過程可分為如下幾步：
（一）刺激細(xì)胞（DCs）的制備
A. 取健康志愿者肝素抗凝的外周血,，淋巴細(xì)胞分離液分離單個核細(xì)胞
B. 以 10％ FCS-RPMI 1640 懸浮細(xì)胞置培養(yǎng)瓶中,，37℃、5％ CO2 培養(yǎng) 2 小時,，輕輕翻過培養(yǎng)瓶,，棄掉培養(yǎng)上清，將非貼壁細(xì)胞棄掉,，即得貼壁的單核細(xì)胞
C. 補加 10％ FCS-RPMI 1640 同時加入 20 ng/ml 的 hGM-CSF,，500 IU/ml 的 IL-4，培養(yǎng)至第 7 天,，收集懸浮細(xì)胞,，即為 DCs
D. 刺激細(xì)胞經(jīng) 25 μg/ml 的絲-裂-霉-素 C 或 2000 rad y-射線照射處理使刺激細(xì)胞失去增殖能力。
（二）反應(yīng)細(xì)胞的制備
A 取健康人外周血制備單核細(xì)胞,，PBS 洗 3 次后,，37℃、5％ CO2 貼壁 2 小時,，收集懸浮細(xì)胞,，作為反應(yīng)細(xì)胞
B 以 RPMI 1640 培養(yǎng)液重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度至 1x106 個/ml,。
（三）混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)
A 將刺激細(xì)胞調(diào)整濃度分別為 1x106,、5x105、2x10,、1x105、5x104 個/ml,， 10％FCS-RPMI 1640 培養(yǎng)于 96 孔培養(yǎng)板中,，每濃度設(shè)立 3 孔，100μL/孔
B 將反應(yīng)細(xì)胞濃度按 1x106 個/ml 每孔分別加入上述各孔中,，100μl/孔
C 同時設(shè)立刺激細(xì)胞對照組（不同濃度刺激細(xì)胞 100μl＋培養(yǎng)液 100μl）和反應(yīng)細(xì)胞對照組（反應(yīng)細(xì)胞 100μl＋培養(yǎng)液 100μl）
D 37℃,，5％ CO2 培養(yǎng) 5 天后，3 H-TdR 摻入率檢測反應(yīng)細(xì)胞的增殖水平,。


注意事項

1. 實驗中注意無菌操作
2. 如作單向混合淋巴細(xì)胞實驗,，則刺激細(xì)胞接受照射劑量要準(zhǔn)確，使細(xì)胞暫時存活,，但失去增殖的能力,。


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安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學(xué)研究,、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn),、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴增和生產(chǎn),，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化,、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品,；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響,、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品,。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療,、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè),。


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