1. 準備下列試劑和材料：

60 mm MEF 滋養(yǎng)板（接種不能超過 7 天）

帶棉塞無菌巴斯德吸管

無 Ca2+ 和 Mg2+ PBS

ES 生長培養(yǎng)基

胰酶溶液

2. PBS 沖洗 ES 細胞,，巴斯德吸管加胰酶溶液覆蓋培養(yǎng)皿底（2 ml/p60）

3. 37℃ 孵育 5 分鐘左右,，至細胞脫落,。

4. 巴斯德吸管輕輕吹吸胰酶處理細胞 4~6 次,，分散 ES 細胞,。分散的細胞,，包括單細胞和小的細胞團，轉(zhuǎn)移至裝有 2 ml 預(yù)熱（37℃）ES 生長培養(yǎng)基的 15 ml 離心管,。

5. 離心收集細胞,。吸掉上清，留約兩倍于細胞沉淀的體積,。輕彈離心管懸浮細胞,。加 10 ml ES 生長培養(yǎng)基，吹吸至懸液均勻,。

6. 計數(shù)細胞,。由于 ES 細胞較 MEF 細胞小，呈圓形,，二者很容易區(qū)分,。

7. ES 細胞接種 60 mm MEF 滋養(yǎng)板。吸掉 MEF 滋養(yǎng)細胞培養(yǎng)基,，加入懸于 5 ml ES 生長培養(yǎng)基的 ES 細胞,。

8. 每天換一次液，加 5 ml ES 生長培養(yǎng)基,。

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