在培養(yǎng)細胞過程中，同學們最擔心的就是細胞污染,。因此,，今天給大家分享如何辨別細胞污染的經(jīng)驗,，趕快學起來吧~

一、肉眼觀察

把培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿拿起來,，對者光線檢查

●渾濁情況：即使細胞密度很高,，培養(yǎng)基也應(yīng)該是透明的。輕輕移動或晃動培養(yǎng)瓶,，觀察培養(yǎng)基的渾濁或懸浮情況,，一些霉菌可能會在培養(yǎng)基的表面形成菌落。

●培養(yǎng)基顏色的變化,。酸性條件下,，加了酚紅的培養(yǎng)基會由紅變黃，而堿性條件下會變成紅紫色,。細菌污染常常會使培養(yǎng)基變成黃色,，真菌污染會使培養(yǎng)基變成深紫紅色。

注意：丟掉細胞以前要仔細檢查一下,，快速生長和生長過量的細胞培養(yǎng)基也會變黃,。當培養(yǎng)箱中CO2的濃度變化時培養(yǎng)基的顏色也會變成黃色（CO2濃度太高）或是粉紅色（CO2 濃度太低）。

●聞,！當然不能打開瓶子去聞,，把鼻子貼在瓶口聞,，許多污染發(fā)生以后都會散發(fā)出易察覺的,、特殊的氣味，甚至打開培養(yǎng)箱門就聞到了,。

二,、顯微觀察

在倒置顯微鏡下，先用低倍（10x）再用高倍（40x）物鏡（總放大倍數(shù)為400）觀察細胞培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中的細胞：

●其他有機體：在低倍鏡下,，真菌的菌絲體成長棒狀,，并橫穿整個視野，還可以觀察到酵母,，有時呈小圓球形,，有時還有芽。

在高倍鏡下可以觀察到細菌,，它們可能是棒狀或球狀,，單獨成鏈或成團存在，它們也可能和細胞混在一起,，并且明顯處于細胞內(nèi)部,，有些細胞可能已經(jīng)裂解變得模糊。觀察時可能每兩個視野才出現(xiàn)一個污染（當然也算被污染了?。?，而且可能污染物是可以運動的,。

●損傷細胞：感染會殺死細胞，可能導(dǎo)致每個細胞都裂解/細胞層從附著物上全剝離,，更可能的是細胞變得不規(guī)則（或大或?。诘捅剁R下是黑色的粒狀,。

（1）懸浮細胞

懸浮培養(yǎng)細胞比貼壁培養(yǎng)細胞更加難以顯微觀察,，尤其是高倍顯微鏡下。

●將培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿放在顯微鏡的載物臺上,，靜置一會,。將焦距對準器皿的底部，觀察那些輕微附著的細胞,，因為它們可能已經(jīng)接觸到了微生物,。

●對準整個培養(yǎng)瓶焦距， 當發(fā)現(xiàn)細胞的時候,，用細聚焦調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)節(jié),，仔細檢查周圍的培養(yǎng)基有沒有污染發(fā)生。

（2）貼壁細胞

三,、制片觀察法

如果你不能確定是否發(fā)生了污染

●制作濕涂片或染色片：取1 ml培養(yǎng)基離心,，用50μl培養(yǎng)基或緩沖液重新懸浮細胞，滴一滴到載玻片,，蓋上蓋玻片制成濕涂片,；或涂片、固定并染色（甲基蘭或革蘭氏染液）,，在高倍鏡下觀察,。

●將細胞在營養(yǎng)培養(yǎng)基或血瓊脂培養(yǎng)基上劃線，37℃培養(yǎng)3天,。如果有菌落,，那么細胞被污染了。

●取1 ml的細胞培養(yǎng)液至無菌的微量離心管中,，37℃培養(yǎng)3天,。觀察到渾濁物，做濕涂片顯微鏡觀察,。

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