小鼠心肌成纖維細胞的組織來源于實驗動物的正常心臟組織，心臟是脊椎動物身體中最重要的一個器官,，主要功能是提供壓力，把血液運行至身體各個部分,。
心臟的作用是推動血液流動,，向器官、組織提供充足的血流量,，以供應氧和各種營養(yǎng)物質(zhì),，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳,、無機鹽,、尿素和尿酸等），使細胞維持正常的代謝和功能,。心臟中,，心肌成纖維細胞約占正常心肌組織細胞總數(shù)的60%-70%,，是心臟中非心肌細胞的主要組成部分，廣泛存在于心臟組織中,，包圍心肌細胞,，連接心肌細胞間質(zhì)，與缺血性心臟病,、炎癥,、肥大、梗死等病理狀態(tài)密切相關,。細胞生長方式以長梭狀細胞,，貼壁培養(yǎng)。小鼠心肌成纖維細胞的方法有很多,，賽百慷提供的心肌成纖維細胞分離方法有兩種，一種是貼塊法,，一種是消化法,，這兩種方法都可以用于分離和培養(yǎng)原代細胞。
1. 小鼠頸椎脫臼處死后,，剃除腹胸部的被毛，放入裝有75%酒精的燒杯中浸泡5min,。
2. 取出小鼠，在無菌環(huán)境下打開胸腔,，取出心臟組織,，注入盛有無菌1×PBS的培養(yǎng)皿中，洗凈組織表面的血液,。3. 將清洗干凈的心臟組織轉(zhuǎn)入裝有75%酒精的培養(yǎng)皿中浸泡15s以殺死大多數(shù)的心臟被膜細胞,，浸泡完成后立即轉(zhuǎn)入裝有無菌1×PBS的培養(yǎng)皿中震蕩清洗,。4. 清洗完成后，用剪刀鑷子配合除去主動脈弓和心房組織,，僅保留心室部分,，再次用1×PBS清洗去除心室內(nèi)的血液。5. 將清洗干凈的心室組織用剪刀減成1mm3大小左右的碎塊,，之后用PBS清洗若干次后按下述兩種方法之一進行后續(xù)操作。
6. 將清洗好的碎塊轉(zhuǎn)入另一培養(yǎng)皿中,，用0.25%胰蛋白酶消化液浸泡組織，室溫消化3-5min,。7. 消化完成后,，添加數(shù)毫升FBS終止消化，之后吸棄液體,，加PBS清洗組織塊1次后，用200ul吸頭將組織塊平均接種于T-25培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)面上,，之后將培養(yǎng)瓶放置于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中,，靜置2-4h,。8. 待組織處于略微脫水的狀態(tài)時，小心添加2ml完培養(yǎng)基,，添加時注意盡量不要將組織塊沖起,，要使培養(yǎng)基接觸所有的組織塊,。9. 之后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),，一般2-4天后成纖維細胞會從組織塊周圍爬出，待爬出的細胞有較多數(shù)量時,，可將細胞消化下來,，去除組織塊，轉(zhuǎn)入另一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。6. 將清洗好的碎塊轉(zhuǎn)入另一離心管中,，加入混合消化液（0.08%胰酶+0.06%Ⅱ型膠原酶）37℃水浴消化8min后，吸取上層混懸液棄去,。7. 余下組織加入混合消化液10ml,，37℃水浴震蕩消化10min；吸取上層懸液至另一離心管中,，加入適量FBS終止反應,；剩余沉淀物再加消化液消化3-5次,，直至組織塊消化。8. 按1∶1加入含血清的培養(yǎng)基,，中止酶反應,，懸液過150目網(wǎng)篩去除較大的組織塊。9. 收集全部中止后的消化液于離心管中,，300g,，離心10 min，棄去上清,，加入培養(yǎng)液重懸細胞后計活細胞數(shù)。10. 調(diào)整細胞密度以1× 106個/ml 接種入的T-25培養(yǎng)瓶中,，每瓶添加2ml細胞懸液,。11. 培養(yǎng)瓶放置于37℃,，5% CO2培養(yǎng)箱中靜置40min后,，吸棄上清液以去除未貼壁的非成纖維細胞和死細胞，再添加5ml完培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。
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