一、  器械
顯微器械：眼科剪一把,，直彎眼科鑷各一把,，細(xì)結(jié)鑷一把，手術(shù)刀一把,，針頭諾干
殺老鼠器械：手術(shù)剪一把,，大鑷子一把，彎眼科鑷一把,，組織鉗一把,，50ml燒杯一個(gè)（錫紙包好）
另外：10ml離心管兩個(gè)，培養(yǎng)皿兩個(gè),，10ml的瓶子三個(gè),，小濾器兩個(gè)，硅膠板一塊,，培養(yǎng)瓶蓋子諾干

二,、試劑
D-HANKS液250ml，雙抗2ml（青霉素16萬(wàn)U/ml鏈霉素15萬(wàn)U/ml）,，一型膠原酶,，木瓜酶,，BSA。后三種加上D-HANKS配成1ml的消化液,，終濃度皆為1mg/ml,。無(wú)血清DMEM和含20％FBS的DMEM

三、步驟
1．  取大鼠，稱(chēng)重，水合氯醛0,。3ml/100g腹腔麻醉
2．  綁好大鼠，先剪開(kāi)腹腔,，剪斷腹部大動(dòng)脈放血，后剪開(kāi)胸腔,，取肺
3．  放入燒杯,，后移入超凈臺(tái)，置于冰盒上,。以后的操作皆在冰盒上操作
4．  倒入已加雙抗的D-HANKS,，清洗肺部，扯掉食管,，剪掉心臟
5．  用針頭將肺固定在硅膠板上,，硅膠板置于培養(yǎng)皿里
6．  用鑷子將肺的內(nèi)外膜除去，只剩下平滑肌
7．  用眼科剪將肺部剪成1－2mm的小碎塊
8．  將碎塊移入配好的消化液中,，放入培養(yǎng)箱中,，消化15min
9．  取出，加入無(wú)血清的DMEM,，約10ml,，移入離心管中
10．  980轉(zhuǎn)/min，離心10min
11．  倒掉上清,，加入約1ml含20％FBS的DMEM
12．  將碎塊用滴管加入25ml的培養(yǎng)瓶里,，液體不要加多，有種濕濕的感覺(jué)即可,。一到兩天可以再加點(diǎn)液體
13．  大概五到七天可以爬出

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