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轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中,，應(yīng)選擇什么PCR酶？

時(shí)間：2022/6/8閱讀：1773
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轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中,，應(yīng)選擇什么PCR酶

  1. Taq酶
  2. 高保真酶


這取決于你的克隆方案,，是用平末端還是粘性末端,。

如果后續(xù)克隆用平末端連接，可以使用高保真酶,，產(chǎn)生的末端就是就平末端,，進(jìn)行平末端連接。

如果后續(xù)克隆用粘性末端,，使用普通的Taq酶就可以了,。Taq會(huì)在產(chǎn)物末端多帶一個(gè)A尾巴，對(duì)應(yīng)的載體是帶T尾巴的T載體,。

如果在引物設(shè)計(jì)上,，在PCR產(chǎn)物末端引入一些酶切位點(diǎn)序列，那么尾巴就會(huì)更長,。加入尾巴時(shí)應(yīng)考慮目的基因插入載體的方向,，設(shè)計(jì)酶切位點(diǎn)序列尾巴。如果尾巴設(shè)計(jì)反了,，插入的目的基因也是反方向的,，就無法起效,。



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