流式數(shù)據(jù)分析時,，應(yīng)該把門設(shè)在哪里合適呢,，特別是那些分群不明顯的結(jié)果。

我們知道流式細胞術(shù)常見的有空白對照（未染色細胞）,、同型對照和FMO對照,，每種對照適用于什么情況呢？

1,、空白對照：空白對照的作用是作為電壓調(diào)節(jié)的參考,，調(diào)整電壓參數(shù)使細胞信號在圖上各個通道的合適位置。同時,，也是可以看到細胞的本底信號,，圈門時直接排除。

未處理的細胞,，不能作為處理組細胞的圈門依據(jù),，需要使用相同處理組的空白對照，來觀察細胞的本底信號。

空白對照適用于細胞分群明顯,、背景熒光弱,、已有大量研究的分群明確的細胞群圈門，例如CD3,、CD4,、CD8等等。

2,、同型對照（isotype）：同型對照的作用是排除背景熒光,，使用同型對照可以更準(zhǔn)確地排除假陽性。

例如,，以下這張圖,，黑色線的是空白對照，黃色是同型對照,，紅色是實驗組染色細胞,，可以看出同型對照和空白對照會有所差別，會有少量的非特異性染色,。

當(dāng)非特異性染色比較強時,，如果繼續(xù)用空白對照作為圈門依據(jù)，實驗結(jié)果就不能準(zhǔn)確反映真實情況了,。

一般抗體說明書都會有同型對照和抗體染色的驗證圖,，我們在選擇抗體時盡量選擇陽性峰與同型對照峰分得比較開的,，通?？贵w公司也會有此抗體對應(yīng)的同型對照出售。

3,、FMO對照：FMO對照也叫做熒光扣除對照/抗體減一對照（Fluorescence-Minus-One Control）,，是指在多色染色分析時，對其中某一個通道設(shè)置的陰性對照,，也就是不染目標(biāo)通道的顏色,，其他指標(biāo)都染色。多在研究不同細胞亞群表達某些重要的表型分子,、細胞因子等時應(yīng)用,。

FMO對照有兩個作用：

（1）多色分析時，有些通道的信號不好區(qū)分,，可能存在某個熒光對該通道干擾很大,，可以使用FMO對照來找到這個熒光。

（2）作為我們需要重點分析的某個指標(biāo)的陰性對照,，可以排除全染的背景影響,，有助于更準(zhǔn)確地圈門。

對于一些分群不明顯，或表達量不高的指標(biāo),，使用FMO對照作為圈門依據(jù)會比空白對照更合適,。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊,，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊,。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染,、大規(guī)模生物生產(chǎn),、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑,；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn),，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù),；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化,、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL,、對細胞無毒性影響,、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),，努力發(fā)展為基因治療,、細胞治療的生物科技企業(yè)。