使用細(xì)胞細(xì)胞包被液包被細(xì)胞培養(yǎng)板,，將傳代或復(fù)蘇凍存的人間充質(zhì)干細(xì)胞接種到6孔板上,，密度為2×105 -3×105 cells/cm2或2×105 -3×105 cells/孔，置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到80%-90%時(shí),，小心的將孔內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基吸掉，向6孔板中加入2mL人間充質(zhì)干細(xì)胞脂肪分化培養(yǎng)基,以此記為第0天,。

以下是總結(jié)的染色方法     

染色步驟：

（1） 先小心輕緩倒去培養(yǎng)液。 
（2） 用pbs輕緩漂洗,。
（3）加10%中性甲醛或者95%以上的酒精固定30min以上
（4） 稀釋改良型即用油紅染色試劑盒,，油紅：PBS＝3:2，室溫放置10min
（5）染色10-20min左右,，加的體積覆蓋住板底即可,，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml,。
（6）脫色,，用75%酒精/60%異丙醇漂洗，除去多余的染料

（7） 復(fù)染,，淡蘇木染色1/5分鐘,，pbs漂洗（這一步不做也可，看試驗(yàn)需要,，并且蘇木素會(huì)把胞漿染紅,，如要顯示核， hoechst33342也可以,，濃度5微克/毫升染10分鐘即可把核染上）,。
（8）甘油明膠封片（封片后可長(zhǎng)期保存）。

（9） 若不用明膠封片,，請(qǐng)盡快拍照,。

油紅O染色試劑盒在傳代培養(yǎng)中，接種密度是影響體外培養(yǎng)間質(zhì)干細(xì)胞增殖潛能的重要因素,。低密度接種時(shí),，間質(zhì)干細(xì)胞的增殖能力明顯提高，而誘導(dǎo)細(xì)胞分化時(shí)則需要較高的細(xì)胞密度,，這可能與分化時(shí)細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用有關(guān),。而在培養(yǎng)過程中,，若細(xì)胞過度融合會(huì)促進(jìn)其分化趨向，故要保持干細(xì)胞未分化狀態(tài),，要及時(shí)傳代,。

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