常見細(xì)胞污染類型及預(yù)防辦法

時間：2022/1/4閱讀：1485

凡混入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中對細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染,，細(xì)胞污染不能*被消除,，但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性。

本文將簡要介紹幾種常見的細(xì)胞污染類型及處理方法,。

常見污染類型

細(xì)菌污染

特征：大小在0.5~5 μm,，比動物細(xì)胞小很多。多呈球狀或桿狀,，形態(tài)規(guī)則,，分布均勻；增殖速度快,，一般污染后48~72小時爆發(fā)式增殖,；營養(yǎng)消耗快，培養(yǎng)基很快變黃,，變渾濁,；鏡下觀察有明顯的定向運(yùn)動。

處理方法：輕度污染可用10X雙抗清洗處理,，重度污染建議消殺后丟棄,。

真菌污染

特征：呈鏈球狀或絲狀。常形成肉眼可見的菌落,，培養(yǎng)基顏色無變化或變紫,，僅對局部細(xì)胞影響較大，其他地方生長正常。會形成孢子，容易污染其他細(xì)胞,。

處理方法：真菌污染較難*,，不建議保留，建議消殺后丟棄,。

支原體污染

特征：最小的微生物，無法通過光學(xué)顯微鏡看見，但可通過電鏡觀察到,。感染支原體的細(xì)胞,，在某一時間點(diǎn)碎片突然增多，隨著傳代,，細(xì)胞狀態(tài)顯著變差,。支原體污染可通過氣溶膠傳播，影響同一細(xì)胞房其他細(xì)胞,。

鑒定方法：PCR法,、顯色法、熒光染色法等,。

處理方法：若細(xì)胞狀態(tài)尚可,，添加支原體抑制劑培養(yǎng)2-3代可轉(zhuǎn)陰；若細(xì)胞狀態(tài)很差,，建議消殺后丟棄,。

黑膠蟲污染

特征：無明確定義，鏡下無法直接觀察到,。主要表現(xiàn)為細(xì)胞狀態(tài)差,，黑點(diǎn)和碎片多，布朗運(yùn)動,。通過檢測發(fā)現(xiàn)主要為支原體污染,，部分為未知的增殖不明顯的微生物污染。

處理方式：若細(xì)胞狀態(tài)尚可,，添加黑膠蟲/支原體抑制劑培養(yǎng)2-3代可轉(zhuǎn)陰,；若細(xì)胞狀態(tài)很差，建議消殺后丟棄,。

細(xì)胞交叉污染

特征：即不同的細(xì)胞混雜在一起

鑒定方法：

同種屬：STR鑒定,，多等位基因數(shù)大于3個。
（需考慮本身的遺傳背景,，如EA.hy 926為融合細(xì)胞,，本身就包含兩套遺傳信息）

不同種屬：PCR法，對種屬特異性基因進(jìn)行擴(kuò)增,，不同種屬產(chǎn)物大小不同,。

處理方法：建議重新引種。

細(xì)胞污染后的處置

細(xì)胞一旦發(fā)現(xiàn)有污染出現(xiàn),，應(yīng)及時對所用試劑和耗材進(jìn)行清理,。耗材可更換新的或者重新高壓滅菌，試劑可重新過濾除菌或者更換新批次,，操作臺和細(xì)胞房需用消毒液進(jìn)行全面清潔消殺后方可復(fù)蘇新的細(xì)胞,，以免反復(fù)出現(xiàn)污染。

污染防治策略

細(xì)胞房環(huán)境控制

環(huán)境要求：

潔凈區(qū)10000級,，局部100級,，定期進(jìn)行沉降菌檢測

環(huán)境消毒：每周一次定期消毒滅菌

1）地面/墻面：84消毒液,、新潔爾滅交叉使用

2）環(huán)境消毒：定期紫外照射，臭氧熏蒸

3）儀器設(shè)備表面：75%酒精擦拭

實(shí)驗(yàn)人員管理

著裝：

著連體衣,，戴口罩,、手套，頭發(fā),、手腕等要包好，減少皮膚外露,。

行為：

減少走動,，出入關(guān)門，操作時不要講話,。

技能:

養(yǎng)成良好的無菌操作習(xí)慣,。

其他：

減少共用物品，公共使用區(qū)域統(tǒng)一使用習(xí)慣,，區(qū)分潔凈區(qū)域和有風(fēng)險的區(qū)域,。

實(shí)驗(yàn)用品管理

試劑：

使用前確保無菌，自己配制的試劑需過濾除菌后再使用,。

耗材：

需要重復(fù)使用的耗材確保按照規(guī)定清洗,、高溫高壓滅菌，使用滅菌指示帶,。滅菌后烘干的耗材立刻放進(jìn)超凈臺,，一周內(nèi)使用完畢，未使用完的,，需重新滅菌再使用,。

儀器設(shè)備：

定期擦拭消毒，培養(yǎng)箱,、顯微鏡托盤等高風(fēng)險區(qū)域需經(jīng)常清潔,，培養(yǎng)箱水盤和復(fù)蘇用的水浴鍋需添加抑菌劑。

其他：

當(dāng)出現(xiàn)培養(yǎng)物泄漏時,，應(yīng)及時清理干凈,；出現(xiàn)局部污染時，應(yīng)找出污染源并對環(huán)境整體消毒,。

以上就是本期的內(nèi)容,，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊,。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究,、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn),、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑,；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù),；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品,；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL,、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品,。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè),。

常見細(xì)胞污染類型及預(yù)防辦法

會員登錄

收藏該商鋪

提示