DNA 溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當(dāng)加入乙醇時(shí),乙醇會奪DNA周圍的水分子,，使DNA失水而易于聚合,。一般實(shí)驗(yàn)中,是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混合,其乙醇的最終含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇來替代懈水乙醇(因?yàn)闊o水乙醇的價(jià)格遠(yuǎn)遠(yuǎn)比95%乙醇昂貴),。但是加95%的乙醇使總體積增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA損失也增大,尤其用多次乙醇沉淀時(shí),就會影響收得率,。折中的做法初次沉淀DNA時(shí)可用95%乙醇代替無水乙醇,最后的沉淀步驟要使用無水乙醇。也可以用0.6倍體積的異丙醇選擇性沉淀DNA.一般在室溫下放置15-30分鐘即可,。

材料與儀器

DNA
乙酸鈉乙醇
EP管低溫離心機(jī) 移液器 -70度冰箱

步驟

1. 酶切前確定待切樣品的濃度, 并選擇合適的限制性內(nèi)切酶和配套Buffer,。

2. 在離心管中加入如下成分：

10xBuffer　 1ul

待切樣品　　　xul

酶　　　　　　0.5-1ul

______________________

加水補(bǔ)足10ul

3. 混勻樣品并短暫離心使樣品沉于管底。

4. 將離心管置于37℃中溫育1-3hr,，若待切樣品為PCR 產(chǎn)物,，則可將反應(yīng)時(shí)間適當(dāng)延長。

5. 用未酶切的質(zhì)粒作為對照,，瓊脂糖電泳鑒定酶切結(jié)果。

注：當(dāng)酶切樣品用于回收而不是鑒定時(shí),，可按比例適當(dāng)加大反應(yīng)體積,。雙酶切可選用二者活性都較高的Buffer 或者通用Buffer，但要注意不能有星反應(yīng)。

注意事項(xiàng)

移去上清液時(shí)需要緩慢操作,，以免將DNA樣品弄出,。

常見問題

乙醇可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學(xué)反應(yīng),對DNA很安全,因此是理想的沉淀劑。

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安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究,、活體動物轉(zhuǎn)染,、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑,；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù),；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品,；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL,、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品,。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè),。

乙醇沉淀法

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