DNA 溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在,，當加入乙醇時,乙醇會奪DNA周圍的水分子,，使DNA失水而易于聚合,。一般實驗中,是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混合,其乙醇的最終含量占67%左右,。因而也可改用95%乙醇來替代懈水乙醇(因為無水乙醇的價格遠遠比95%乙醇昂貴),。但是加95%的乙醇使總體積增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA損失也增大,尤其用多次乙醇沉淀時,就會影響收得率,。折中的做法初次沉淀DNA時可用95%乙醇代替無水乙醇,最后的沉淀步驟要使用無水乙醇,。也可以用0.6倍體積的異丙醇選擇性沉淀DNA.一般在室溫下放置15-30分鐘即可。

材料與儀器

DNA
乙酸鈉乙醇
EP管低溫離心機移液器 -70度冰箱

步驟

1. 酶切前確定待切樣品的濃度, 并選擇合適的限制性內(nèi)切酶和配套Buffer,。

2. 在離心管中加入如下成分：

10xBuffer　 1ul

待切樣品　　　xul

酶　　　　　　0.5-1ul

______________________

加水補足10ul

3. 混勻樣品并短暫離心使樣品沉于管底,。

4. 將離心管置于37℃中溫育1-3hr，若待切樣品為PCR 產(chǎn)物,，則可將反應(yīng)時間適當延長,。

5. 用未酶切的質(zhì)粒作為對照，瓊脂糖電泳鑒定酶切結(jié)果,。

注：當酶切樣品用于回收而不是鑒定時,，可按比例適當加大反應(yīng)體積。雙酶切可選用二者活性都較高的Buffer 或者通用Buffer,，但要注意不能有星反應(yīng),。

注意事項

移去上清液時需要緩慢操作，以免將DNA樣品弄出,。

常見問題

乙醇可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學(xué)反應(yīng),對DNA很安全,因此是理想的沉淀劑,。

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乙醇沉淀法

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