冷凍保存使用的 DMSO 等級,，必須為 Tissue culture grade 的 DMSO，其本身即為無菌狀況,，第一次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中,，保存于 4 ℃，避免反復(fù)冷凍解凍造成 DMSO 的裂解而釋出有害物質(zhì),，并可減少污染的機會,。若要過濾 DMSO，則須使用耐 DMSO 的 Nylon 材質(zhì)濾膜,。

3,、欲冷凍保存時，細胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細胞濃度,？

冷凍管內(nèi)細胞數(shù)目一般為 1x106 cells/ml vial,，融合瘤細胞則以 5x106 cells/ml vial 為宜,。

4、冷凍保存細胞的方法,？

冷凍保存方法一：冷凍管置于 4 ℃ 30~60 分鐘 →-20 ℃ 30 分鐘 → -80 ℃ 16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽 vapor phase 長期儲存,。

冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序的可程序降溫機中每分鐘降 1~3 ℃ 至 –80 ℃ 以下，再放入液氮槽 vapor phase 長期儲存,。–20 ℃ 不可超過 1 小時,，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入 –80 ℃ 冰箱中,，存活率稍微降低一些。

5,、細胞凍存太多會不會浪費,？

每一種細胞系都應(yīng)有充足的凍存儲備，防止由于細胞污染等因素造成的細胞系的絕種,，而且每一批次培養(yǎng)的細胞狀態(tài)都不同,，應(yīng)該挑選幾個狀態(tài)較好的批次凍存保種。另外二倍體細胞等有限細胞系如果暫時不用最好凍存以免傳代太多,，造成細胞衰老或者發(fā)生改變,。

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細胞凍存的方法和注意事項

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