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葉組織
研磨懸浮緩沖液
燒杯 Polytron 勻漿器
1. 組織勻漿
(1) 收集 10 g 葉組織,，放進(jìn)一 400 ml 的燒杯中,。
(2) 加入 200 ml 冰冷的研磨懸浮緩沖液,。在 4℃ 的房間中,，用 Polytron 勻漿器進(jìn)行 6~7 個(gè) 3 秒鐘脈沖勻漿葉組織,。
研磨重懸緩沖液：
10 mmol/L EDTA
50 mmol/L HEPES-KOH，pH 8.0
0.33 mol/L 甘露醇
0.5 g/L BSA ( 無(wú)脂肪酸）
5 mmol/L 抗壞血酸鹽（用前添加）
(3) 用網(wǎng)層米拉布（Calbiochem) 過(guò)濾勻漿,，濾液倒進(jìn) 4 個(gè) 50 ml 離心管中,。
2. 勻漿在 8000 g（Sorvall HB-4 轉(zhuǎn)頭，7000 r/min）離心一分鐘,。
3. 小心地傾去上清,。加 1 ml 1x SH。用駝毛刷重新懸浮葉綠體,，動(dòng)作要輕,。
4. 吸 2 ml 含 35% Pecoll 的 1x SH 到一個(gè) 15 ml 的離心管中作為緩沖層：其上覆蓋重懸浮的葉綠體。13000 g（Sorvall HB-4 轉(zhuǎn)頭,，10000 r/min）離心 3 分鐘,。
5. 棄去上清，沉淀用 15 ml 1x SH 洗兩次,，再用適當(dāng)體積的 1x SH 重新懸浮,。
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