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上海中科院藥物所,使用zeta life公司Advanced DNA RNA轉染試劑成功轉染BV-2小鼠膠質瘤細胞,，其轉染條件和操作方法分享如下：
一,、轉染條件：
細胞密度：60左右
質粒DNA濃度：700ng/ul
質粒DNA大?。?500bp
培養(yǎng)板：24孔板
轉染試劑用量：電訊
質粒DNA用量：電訊
轉染時間：48小時
二,、操作方法：
提前 1 天接種細胞：細胞匯合度在 60-80%左右,，再進行轉染。
核酸復合物制備：將核酸與轉染試劑按照 1:1 關系直接混合,，用移液器吹吸 10-15 次混勻,，室溫靜 止 10-15 分鐘。
在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復合物：根據參考用量在細胞中加入核酸復合物,，并輕輕混勻,；細胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。
細胞換液：轉染 24 小時后對細胞進行正常換液,，懸浮細胞轉染過程中不用換液,。
分析結果：質粒 DNA 轉染 48-72 小時后熒光檢測轉染效率，48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達,。若 進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,，則在轉染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉染后 9 小時熒光檢測轉染效率,，48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達,。
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