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深圳市安培生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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生物三凝膠基質(zhì)
細(xì)胞因子分子
生物樣本庫(kù)
蛋白研究系列

補(bǔ)體介導(dǎo)法細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)

時(shí)間：2021/11/1閱讀：1220
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材料與儀器

C57BL／6J小鼠
Hank’s液 單克隆抗體 補(bǔ)體 伊紅-Y染液
眼科剪 眼科鑷 平皿 不銹鋼網(wǎng) 試管 吸量管 尖吸管 載玻片 蓋玻片 顯微鏡

實(shí)驗(yàn)步驟


一,、實(shí)驗(yàn)方法
 
1.  小鼠胸腺細(xì)胞懸液的制備：將4～6周齡小鼠采用頸椎脫臼法處死,，取出胸腺放入已加入約4 ml冷Hank’s液的平皿中，在100目的不銹鋼網(wǎng)上研磨后,，過篩,，放入試管，離心1 000 rpm,，5分鐘,，用Hank’s液洗兩次。將沉淀的細(xì)胞重懸于Hank’s液中,，配成1×107/ml細(xì)胞懸液,。
 
2.  取試管3支，標(biāo)明順序,，依據(jù)下表依次加入1×107/ml胸腺細(xì)胞懸液、抗小鼠Thy-1的單克隆抗體(最適稀釋度)及Hank’s液,，放入37℃水浴30分鐘,。
 
3.  取出后每管加入1%伊紅-Y染液1滴，混勻,，室溫放置2分鐘,。
 
4.  重新混勻后分別在一張載玻片上滴片，加蓋玻片鏡檢,。先在低倍鏡下觀察,，再用高倍鏡觀察，比較3管中細(xì)胞死活情況,。
 
二,、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
 
死細(xì)胞呈紅色，無光澤且腫脹變大,；活細(xì)胞不著色,、有光澤且形態(tài)正常。
 
高倍鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞并計(jì)算其中死細(xì)胞的百分?jǐn)?shù),。計(jì)算公式如下：死細(xì)胞百分?jǐn)?shù)= EQ EQ \F(實(shí)驗(yàn)管死細(xì)胞數(shù)%-對(duì)照管死細(xì)胞數(shù)%,，100%-對(duì)照管死細(xì)胞數(shù)%)



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