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核酸提取的方法

時間：2021/10/22閱讀：1945
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核酸是遺傳信息的載體,，是最重要的生物信息分子,，是分子生物學研究的主要對象，因此核酸的提取是分子生物學實驗技術(shù)中最重要,、最基本的操作,。

核酸提取系列目錄

一、DNA提取方法簡介

二,、DNA提取常見問題,、原因分析及其對策

三、RNA提取方法簡介

四,、RNA提取及其RT-PCR常見問題,、原因分析及其對策


一、DNA提取方法簡介

1,、基因組DNA的提取

1.1,、CTAB法

1.2、SDS法

1.3,、其它

2,、非基因組DNA的提取

2.1,、質(zhì)粒DNA的提取

2.1.1、堿裂解法

2.1.2,、煮沸法

2.2,、線粒體、葉綠體DNA的提取

差速離心結(jié)合SDS裂解法

1,、基因組DNA的提取

1.1,、CTAB法

CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三呷基溴化銨),，是一種陽離子去污劑,，可溶解細胞膜，并與核酸形成復合物,。

具有從低離子強度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性,，在這種條件下，蛋白質(zhì)和中性多聚糖仍留在溶液里,。

該復合物在高鹽溶液中（>0.7mol/L NaCl）是可溶的,，通過有機溶劑抽提，去除蛋白,、多糖,、酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。

注：CTAB溶液在低于15℃ 時會形成沉淀析出,，因此在將其加入冰冷的植物材料之前必須預熱,，且離心時溫度不要低于15℃。


CTAB提取緩沖液的經(jīng)典配方

圖片


Tris-HCl （pH8.0）提供一個緩沖環(huán)境,，防止核酸被破壞,；
EDTA螯合Mg2+或Mn2+離子，抑制DNase活性,；
NaCl 提供一個高鹽環(huán)境,，使DNP（脫氧核糖核蛋白 ）；
CTAB溶解細胞膜,，并結(jié)合核酸,，使核酸便于分離；
β-巰基乙醇是抗氧化劑,，有效地防止酚氧化成醌，避免褐變,，使酚容易去除,。

CTAB提取緩沖液的改進配方
圖片
PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的絡合物，能與多酚形成一種不溶的絡合物質(zhì),，有效去除多酚,，減少DNA中酚的污染,；同時它也能和多糖結(jié)合，有效去除多糖,。

PVP（聚乙烯吡咯烷酮）
PVP 按其平均分子量大小分為四級,，習慣上常以K值表示，不同的K值分別代表相應的PVP平均分子量范圍,。K值實際上是與PVP水溶液的相對粘度有關的特征值,，而粘度又是與高聚物分子量有關的物理量，因此可以用K值來表征PVP的平均分子量,。通常K值越大,，其粘度越大，粘接性越強,。
 圖片
在研磨過程中加入PVP,，其中的CO-N=基有很強的結(jié)合多酚的能力，從源頭上減少了酚類被氧化的機會,。
同時向抽提液中加入還原劑β-巰基乙醇,，后者能打斷多酚氧化酶中的二硫鍵，使多酚不易被氧化,，隨后經(jīng)抽提而去除,。

CTAB法流程圖
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