1,、基因組DNA的提取	1.1、CTAB法
	1.2,、SDS法
	1.3,、其它
2、非基因組DNA的提取	2.1,、質(zhì)粒DNA的提取	2.1.1,、堿裂解法
		2.1.2、煮沸法
	2.2,、線(xiàn)粒體,、葉綠體DNA的提取	差速離心結(jié)合SDS裂解法

1、基因組DNA的提取

1.1,、CTAB法

CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,，十六烷基三呷基溴化銨)，是一種陽(yáng)離子去污劑,，可溶解細(xì)胞膜,，并與核酸形成復(fù)合物。

具有從低離子強(qiáng)度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性,，在這種條件下,，蛋白質(zhì)和中性多聚糖仍留在溶液里。

該復(fù)合物在高鹽溶液中（>0.7mol/L NaCl）是可溶的,，通過(guò)有機(jī)溶劑抽提,，去除蛋白、多糖,、酚類(lèi)等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來(lái),。

注：CTAB溶液在低于15℃ 時(shí)會(huì)形成沉淀析出，因此在將其加入冰冷的植物材料之前必須預(yù)熱,，且離心時(shí)溫度不要低于15℃,。

CTAB提取緩沖液的經(jīng)典配方

Tris-HCl （pH8.0）提供一個(gè)緩沖環(huán)境，防止核酸被破壞,；

EDTA螯合Mg2+或Mn2+離子,，抑制DNase活性；

NaCl 提供一個(gè)高鹽環(huán)境,，使DNP（脫氧核糖核蛋白）,；

CTAB溶解細(xì)胞膜，并結(jié)合核酸,，使核酸便于分離,；

β-巰基乙醇是抗氧化劑，有效地防止酚氧化成醌,，避免褐變,，使酚容易去除,。

CTAB提取緩沖液的改進(jìn)配方

PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的絡(luò)合物，能與多酚形成一種不溶的絡(luò)合物質(zhì),，有效去除多酚,，減少DNA中酚的污染；同時(shí)它也能和多糖結(jié)合,，有效去除多糖,。

PVP（聚乙烯吡咯烷酮）

PVP 按其平均分子量大小分為四級(jí)，習(xí)慣上常以K值表示,，不同的K值分別代表相應(yīng)的PVP平均分子量范圍,。K值實(shí)際上是與PVP水溶液的相對(duì)粘度有關(guān)的特征值，而粘度又是與高聚物分子量有關(guān)的物理量,，因此可以用K值來(lái)表征PVP的平均分子量,。通常K值越大，其粘度越大,，粘接性越強(qiáng),。

在研磨過(guò)程中加入PVP，其中的CO-N=基有很強(qiáng)的結(jié)合多酚的能力,，從源頭上減少了酚類(lèi)被氧化的機(jī)會(huì),。

同時(shí)向抽提液中加入還原劑β-巰基乙醇，后者能打斷多酚氧化酶中的二硫鍵,，使多酚不易被氧化,，隨后經(jīng)抽提而去除。

CTAB法流程圖

核酸提取的方法

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